איחזור של ביציות עכבר

שמי הוא אמאנדה דלי. אני מהמעבדה של ד"ר פול וורנה באוניברסיטת קליפורניה ארווין. היום אציג בפניכם את הפרוצדורה לשאיבת ביציות.

תהליך זה כולל בידוד את ה-videx מהנקבה. לאחר בידוד ה-ovex, נזריק מצע FHM דרך ה-videx, ואז ה-cytes אמורים לצאת מהרחם. עם סיום פעולה זו, נבודד את ה-cytes בתוך המצע ונשתמש בהם לניסויים עתידיים.

בנוסף לבידוד תאים, ניתן להשתמש בפרוצדורה זו לבידוד עוברים בנקודות זמן ספציפיות. סיבה אחת לכך שכדאי לצפות בפעולה זו בפורמט של וידאו היא שחלקיה השונים של חסום הביצה עשויים להיות קשים מאוד לזיהוי. בסרטון זה, אצביע על ה-infundibulum, שם תזריקו את מצע ה-FHM.

כלי הניתוח שבהם תשתמשו הם שתי מערכות של פינצטות חדות וזוג מספריים חדים. צינורות השחלה שהוצאו מהנקבה יונחו במצע FHM, בתוך צלחת תרבית רקמה של 35 מילימטר. הביציות יוחלצו באמצעות מחט בעלת קצה קהה של 30 מילימטר המחוברת למזרק של 1 מיליליטר, וה-uc ייוצב באמצעות פינצטה חדה.

FHM הוא מצע אחסון המשמש לאיסוף התאים. KSOM הוא המצע המשמש לגידול התאים בתוך האינקובטור במקרה שהם הופרו. לאחר שליפת הביצים והעוברים מהביציות (oviduct), נשתמש בפיפט העברה מזכוכית שנמשך מצינור קפילרי, נחבר אליו צינוריות ונשאב אותם בעזרת פיפט פה לתוך מצע אחסון.

משתמשים בכלי זכוכית קעור להחזקת העוברים והביצים. ניתן למקם אותם בכל עיגול קעור כך שיהיו במיקום נפרד, מה שמקל על מציאתם. כלי זה מוצב בתוך המיכל כדי שניתן יהיה להכניסו למדגרה עם CO2 ללא שימוש בשמן.

מעל מצע ה-FHM או ה-KSOM, בהתאם לסוג המצע, מוסיפים מים לבסיס, סוגרים את הברז והנוזל נשאר במקומו. נעשה שימוש ב-70% ethanol כדי להבטיח ששערות לא יחדרו פנימה. נבצע חתך קטן באזור הבטן וחתך בחלל הבטן.

נגדיל את החתך כדי לחשוף את אזור הבטן. לאחר מכן, כדי לחשוף את הרחם, נזיז את המעיים הצידה, ואז הרחם נמצא למטה. הרחם הוא בצורת Y והם מוציאים בזהירות חלק מהרחם.

כאשר היא נגזרת, צינור הביצים נראה כמו ספגטי. אני אנסה לקחת חלק מצינור הביצים. אני אקח את ה-UCT וחלק מהשחלות, העטופות בשומן.

הצד השני יטופל כעת. בשלב זה, שוב, נרים את השחלה או את הרחם. נרים כאן את הרחם, ונחתוך מתחת לנקודת ההצמדה שלנו. צינורות ההובלה נמצאים בשלב זה.

אני אקח חלק מהשחלה של ה-OV איתנו. לאחר מכן, חלק זה ימוקם במצע גידול. הרחם עדיין במצב של התכווצות.

הרחם מורכב משריר חלק, כך שגם כאשר הוא מופרד מהגוף, הנוירונים עדיין פועלים. הרחם מוצג כאן. בעוד שצינור הביצים נראה כמו פסטה והשחלה נמצאת מעליו, צינור הביצים אינו מחובר למעשה לשחלה.

בעוד שהצגנו רק חלק מהשחלה בשלב זה, ידי הדומיננטית היא יד ימין, שבה אני מחזיק את המחט בעלת הקצה הבלתי חד (blunt end needle) בקוטר 30 gauge. אני משתמש בה כפינצטה כדי לבודד את ה-in fibula. ברגע שזו תבודד, אדקור את המחט הבלתי חדה לתוך ה-in fibula ואזריק מעט נוזל שיזרום החוצה מהרחם.

בידי שמאל אני מחזיק פינצטה חדה. היא משמשת לבידוד ה-in fibula ולהחזקת כל הרכיבים במקומם. ה-am dula היא מבנה מבודד בעל צורת חצוצרה.

קצה המחט שלי נמצא בפיבולה, שהחדירה דרך שכבת הרקמה. כדי להבטיח שבידדתי את כל העוברים והביצים, אני נוהג לסחוט את הרחם בדומה לסחיטת שפופרת משחת שיניים. ברגע שמתמקדים בכריות השומן, מחפשים מה שנראה כטיפות שומן סימטריות לחלוטין.

יש שם כעת אחד ממש משמאל לאותוו שומן ארוך. זהו ביצית אחת בודדת. לכן, מה שאעשה הוא להשתמש בפיפט, לשאוב את הביצית ולהעביר אותה למצע החזקה נוסף, כדי שנוכל לבודד את הביציות עצמן.

היום הראיתי לכם כיצד לבודד תאים ממערכת הרבייה הנקבית. בנוסף, הצגתי בפניכם את המבנים השונים שלוואת הביض (oviduct). בפרט, את האינפונדיבולום (infundibulum), שהוא המבנה היחיד שבו ניתן להזריק את מצע ה-FHM.

השתמשתי במחט בכילוג 30. באמצעות טכניקה זו, בידדתי ציטוקיטים ועוברי שהיו נוכחים בדרכי הרבייה של הנקבה. אני יכול להשתמש בהם למחקרי ביטוי גנים או לעבודה טרנסגנית.