Name: ביטוי של חלבונים רקומביננטי השמרים Methylotrophic Pichia pastoris /em (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-25T16:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: למדו להביע חלבונים רקומביננטיים בשמרים Pichia pastoris באמצעות הכנת תאים אלקטרוקומפטנטים, טרנספורמציה ואנליזת Western blot. פרוטוקול זה מספק שיטה אמינה לחקר ביטוי חלבונים ופונקצייתם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לקרן קנדית עבור חדשנות, פיתוח קולומביה הבריטית קרן ידע, לבין המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR) לתמיכה בעבודה זו. MT נתמך על ידי מענק ממרכז טולה היסוד במימון עבור גיוון התפתחות חיידקים (CMDE).

<ol><li>Cereghino, G. P., Cregg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+yeast+in+biotechnology%3A+protein+production+and+genetic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Applications of yeast in biotechnology: protein production and genetic analysis.</a> Curr Opin Biotechnol. 10, 422-427 (1999).</li>
<li>Cregg, J. M., Barringer, K. J., Hessler, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pichia+pastoris+as+a+Host+System+for+Transformations%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Pichia pastoris as a Host System for Transformations.</a> Mol. Cell. Biol. 5, 3376-3385 (1985).</li>
<li>Cregg, J. M., Cereghino, J. L., Shi, J., Higgins, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+protein+expression+in+Pichia+pastoris%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Recombinant protein expression in Pichia pastoris.</a> Mol Biotechnol. 16, 23-52 (2000).</li>
<li>Cereghino, G. P., Cereghino, J. L., Ilgen, C., Cregg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+recombinant+proteins+in+fermenter+cultures+of+the+yeast+Pichia+pastoris%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris.</a> Curr Opin Biotechnol. 4, 329-332 (2002).</li>
</ol>

ביטוי חלבון באמצעות pastoris methylotrophic Pichia שמרים כמערכת המארחת מתואר בפרוטוקול זה. חלבון יכול להיות מופרש לתוך המדיום בהתאם וקטור שיבוט בשימוש. הפרשת חלבון רקומביננטי הופך את טיהור הבאים קל. עם זאת, התנאים המוצג יכול להיות מותאם במיוחד הביטוי של חלבונים שונים ושינויים בתנאים פעמים הביטוי עלול לגרום רמות חלבון מוגברת. וקטור להשתמש בפרוטוקול זה יש את התכונה של epitope c-myc ו נוגדן לכך epitope ניתן לרכוש. זה מאפשר ניתוח של חלבונים אשר יש נוגדנים לא...

ביטוי של חלבונים רקומביננטי השמרים methylotrophic pichia pastoris</em

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

ביטוי החלבון על pastoris Pichia חיידקים אוקריוטים לארח מציעה את האפשרות לייצר כמויות גדולות של חלבון רקומביננטי במערכת ביטוי מהירה וקלה לשימוש. בתור מיקרואורגניזם חד תאיים P. pastoris קל לתפעל גדל במהירות על מדיה זולה בצפיפויות גבוהות התא. להיות eukaryote, פ pastoris הוא מסוגל לבצע רבים שלאחר translational שינויים שבוצעו על ידי התאים האיקריוטים גבוהה את החלבונים רקומביננטי שהושגו לעבור קיפול חלבונים, עיבוד פרוטאוליטי, היווצרות קשר דיסולפיד glycosylation ו [1]. כפי שמרים פ methylotrophic pastoris מסוגל חילוף חומרים מתנול כמקור פחמן הבלעדי. האמרגן חזק מונואמין אלכוהול, AOX1, מוסדר בחוזקה המושרה על ידי מתנול הוא משמש הביטוי של הגן של עניין. לפיכך, הביטוי של חלבון זר יכול להיגרם על ידי הוספת מתנול עד בינוני הצמיחה [2, 3]. יתרון חשוב נוסף הוא הפרשת חלבון רקומביננטי לתוך מדיום גידול, תוך שימוש ברצף אות למקד את החלבון זרים מסלול הפרשה של pastoris פ. רק עם רמות נמוכות של חלבון אנדוגני המופרש לתקשורת על ידי שמרים עצמו ולא חלבונים להוסיף התקשורת, חלבון Heterologous בונה את רוב החלבון הכולל במדיום ומקל על הצעדים הבאים טיהור חלבון [3, 4]. וקטור משמש כאן (pPICZαA) מכיל את מקדם AOX1 לביטוי מוסדר היטב מתנול-Induced, של הגן של ריבית; האות α-factor עבור הפרשת הפרשת חלבון רקומביננטי, גן עמידות Zeocin לבחירה בשני E. coli ו Pichia ו פפטיד C-מסוף המכיל את c-myc epitope ו (6xHis) polyhistidine תג זיהוי וטיהור של חלבון רקומביננטי. אנחנו גם מראים ניתוח כתם המערבי של חלבון רקומביננטי באמצעות נוגדנים ספציפיים נגד myc-HRP הכרה epitope c-myc על וקטור האב.

הפרוטוקול מתאר ביטוי חלבון באמצעות שמרים methylotrophic<em&gt; Pichia pastoris</em&gt;. הכנת תאים שמרים electrocompetent, טרנספורמציה של וקטור עם הגן של עניין אל<em&gt; פ &#39; pastoris</em&gt; ו-DNA טיהור שמרים מבוצעות גם. ניתוח המערבי כתם וטיהור חלבונים בונים את הצעדים האחרונים בפרוטוקול זה ביטוי חלבון.

ביטוי של חלבונים רקומביננטי השמרים Methylotrophic Pichia pastoris</em

ביטוי חלבונים במארח איקריוטי מיקרוביאלי מסוג Pichia pastoris מציע את האפשרות לייצר כמויות גבוהות של חלבון רקומביננטי באופן מהיר ו...

הפרוטוקול הבא מתאר ביטוי חלבון באמצעות שמרים של סוג methyl atrophic yeast opus. מוצגים הכנת תאי שמרים אלקטרו-קומפטנטים והטרנספורמציה של הווקטור עם הגן הרצוי לתוך PPAs, ולאחר מכן שלב של טיהור DNA של השמרים כדי לבדוק את האינטגרציה התקינה של הגן הרצוי אל תוך הגנום של השמרים. לבסוף, נבצע את ביטוי החלבון הרקומביננטי.שלום, אני מריה מהמעבדה של Steven Hallam במחלקה למיקרוביולוגיה ואימונולוגיה באוניברסיטת קולומביה הבריטית. אני מרכוס, גם אני ממעבדה של Helm. היום נראה לכם הליך לביטוי חלבונים רקומביננטיים בשמרורי TRO PQ.Past stories.אנו משתמשים בנוהל זה במעבדה שלנו כדי לחקור חלבונים ממיקרואורגניזמים שלא בודדו, כאשר ה-DNA הסביבתי כבר הופק, נשמר וספריות מטא-גנומיות הוכנו. אם כן, בואו נתחיל. ביטוי של חלבונים רקומביננטיים בשמרים המטרופיים *Pichia pastoris* דורש שיבוט של הגן המבוקש בתוך וקטור ביטוי של *P. pastoris* ובמסגרת קריאה נכונה.בניסוי שלנו, אנו משתמשים בווקטור PPIC Z alpha A. ווקטור זה מכיל את הפרומוטור AO X one לביטוי מבוקר בקפידה של הגן המבוקש בהשראת מתנול, את אות ההפרשה alpha factor להפרשת החלבון הרקומביננטי, את גן העמידות zaas לברירה הן ב-e coli והן ב-pic, ופפטיד ב-C terminal המכיל אפיתופ acemic ותג פולי-היסטדין לזיהוי וניקוי של החלבון הרקומביננטי. לפני הטרנספורמציה, לינאריזו את הווקטור המכיל את הגן המבוקש על ידי עיכול רסטריקציה. אנו משתמשים באנזים PME one, אך ניתן להשתמש באתרים של אנזימי רסטריקציה אחרים, כל עוד המקטע המוכנס אינו מכיל את אותו אתר רסטריקציה.כדי להשיג כמות מספקת של DNA וקטורי ליניארי, הכינו שלוש עד ארבע תגובות עיכול של אנזימי הגבלה בנפח 50 µL במבחנות נפרדות. לאחר העיכול, שלבו את כל התמיסות ורכזו את המבנה שלכם. באמצעות יחידת סינון צנטריפוגית AmCon ויחידת סינון צנטריפוגית MicroCon, תזדקקו ל-5 עד 20 µg של DNA ליניארי ב-5 עד 10 µL של מים סטריליים לצורך טרנספורמציה לתוך PPA dous. כדי להכין תאי PPA dous בעלי כשירות לאלקטרופורזה (electrocompetent), בצעו מריחה של תאים על צלחת A-Y-P-D-S ללא SN ארבעה ימים לפני הטרנספורמציה המתוכננת; גדלו אותם בטמפרטורה של 30 °C למשך יום עד יומיים, או עד להיווצרות מושבות בודדות יומיים לפני הטרנספורמציה.גדלו חמישה milliliters של ה-PPA או הזן במצע YPD בתוך מבחנת Falcon של 50 milliliters בטמפרטורה של 30 degrees Celsius למשך לילה. מקמו את מבחנת ה-Falcon בתוך בקבוק כדי לקבע אותה בשייקר יום אחד לפני הטרנספורמציה. השתמשו ב-0.25 milliliters מהתרבית של הלילה כדי להנחית (inoculate) 500 milliliters של מצע YPD טרי בבקבוק של שני liters.גדלו שוב במהלך הלילה בשייקר בטמפרטורה של 30 degrees Celsius עד להגעה ל-OD 600 של 1.3 עד 1.5. ביום הטרנספורמציה, הכינו מראש קרח, מים סטריליים קרים וסורביטול בריכוז one molar. סנטריפוגו את התאים ב-1500 Gs למשך חמש דקות בטמפרטורה של four degrees Celsius.לאחר הצנטריפוגה, נשעה את המשקע ב-500 milliliters של מים סטריליים קרים בטמפרטורת קרח. בהתאם לנפח מבחנות הצנטריפוגה, ייתכן שיהיה עליכם לחלק את הנפח לשתי מבחנות נפרדות או לבצע מספר סבבים. בצעו צנטריפוגה לתאים פעם נוספת ושעהו את המשקע ב-250 milliliters של מים סטריליים קרים בטמפרטורת קרח.בהתאם לנפח מבחנות הצנטריפוגה, ניתן לאחד את משקעי התאים הנפרדים למבחנה אחת. לאחר הצנטריפוגה, יש לסבב שוב את המשקע (resuspend). העבר את התאים שהוסבבו למבחנת פלקון של 50 מיליליטר ב-20 מיליליטר של סורביטול 1 molar קר בקרח, ובצע צנטריפוגה.לאחר סבב סנטריפוגציה סופי, השביו את המשקע במיליליטר אחד של סורביטול 1 M קר בקרח, לנפח סופי של כ-1.5 מיליליטר. את התאים שהושבו בנבובות מיקרו-סנטריפוגה אחסנו בקרח או בטמפרטורה של 4 °C עד לשימושם לצורך טרנספורמציה. לפני ביצוע טרנספורמציה של המבנה הלינארי המרוכז לתוך תאי PPA, הכינו את הריאגנטים והמכשירים הבאים.מלאו מבחנה למיקרו-צנטריפוגה ב-1 mL של sorbitol בריכוז 1 M והניחו אותה על קרח. הניחו קטרת electroporation של 0.2 cm על קרח.סמנו מבחנה מזכוכית סטרילית בנפח 15 milliliter והכינו פיפטת זכוכית סטרילית. העבירו 80 microliters של התאים electro competent שהוכנו קודם לכן לכלי electroporation בנפח 0.2 centimeter המקומם על קרח.הוסיפו את תמיסת ה-DNA מהפלסמה לתאים וערבבו על ידי הזזת קצה הפ pipette מצד לצד. בכלי האלקטרופורציה. דגרו את הכלי עם התאים על קרח למשך חמש דקות.בשלב הבא, נגב את החלק החיצוני של ה-cuvette בעזרת טישיו ובצע פולס לתאים בהתאם לפרמטרים עבור שמרים מנבטים (budding yeast), כפי שהומלץ על ידי יצרן מכשיר האלקטרופורציה שברשותך. בהדגמה זו נעשה שימוש ב-BioRad gene Pulser עם התנאים הבאים: מתח טעינה של 1500 volts, קיבוליות של 25 micro farads והתנגדות של 200 ohms מיד לאחר הפולס.הוסיפו מיליליטר אחד של סורביטול 1 molar קר מאוד למבחנה. העבירו את תוכן המבחנה למבחנה סטרילית של 15 מיליליטר באמצעות פיפטת זכוכית סטרילית. דגרו את המבחנה בטמפרטורה של 30 °C ללא ניעור למשך 1.5 שעות.לאחר 1.5 שעות, התאים שעברו אלקטרופורציה מוכנים לזריעה. הוסיפו חמישה עד 10 חרוזי זכוכית סטריליים לכל אחת מארבע צלחות YPTS מסומנות המכילות 100 micrograms per milliliter של Zain. פזרו 250 microliters מהאלקטרופורציה.ערבבו בכל צלחת ונערערו את הצלחת אופקית כדי לפרוס את התאים באופן שווה. הניחו לצלחות להתייבש למשך 15 דקות ולאחר מכן הסירו את החרוזיים מהאגרו (agro) על ידי היפוך הצלחות. עטפו את הצלחות בפלסטיק שחור כדי למנוע פירוק של ה-Zain הרגיש לאור, והדגירו את הצלחות כשהן הפוכות למשך יומיים עד שלושה ימים ב-30 degrees Celsius עד להיווצרות מושבות.בחרו 12 מושבות. טהרו אותן על ידי מריחת השיבוטים על צלחות YPDS טריות המכילות 100 µg/mL של zein. כדי להכין תאי PPA לביטוי חלבון, בחרו מושבה בודדת מתוך מושבות ה-pichia המטוהרות והחדירו אותה ל-25 mL של מצע VMGY בבקבוק סטרילי של 250 mL; גדלו בטמפרטורה של 30 °C באינקובטור עם ניעור עד שהתרבית תגיע ל-OD 600 של שניים עד שישה.כאשר התאים מגיעים ל-OD 600 המתאים, הכין מאגר גליצרול של התאים לאחסון. העבר 800 µL של תרבית התאים למבחנה קריוגנית של 2 mL והוסף 200 µL של גליצרול סטרילי. אחסן את מאגר הגליצרול בטמפרטורה של 80- °C.בנוסף, העבירו 1.5 milliliters של תרבית התאים למבחנה של מיקרו-צנטריפוגה. קצרו את התאים על ידי סבוב בצנטריפוגה ב-1300 GS למשך דקה אחת בטמפרטורת החדר. שמרו את המשקע בטמפרטורה של ארבע מעלות Celsius.תאים אלו ישמשו לטיהור DNA משמרים כדי לנתח את רצועות ה-pichia לאחר PCR עם פריימרים ספציפיים למקטע המוכנס על ג'ל אגרוז, על מנת לאשר שהגן המבוקש השתלב בתוך הגנום של ה-pichia. העבר את שאר תרבית ה-25 milliliter לשפופרת Falcon של 50 milliliter ואסוף את התאים על ידי סנטריפוגציה במהירות של 3000 Gs למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר, שפוך את הנוזל העליון והנח את השפופרת הפוכה על נייר סופג להסרת שאריות מדיום. כדי לשטוף את משקע התאים, השהה אותו מחדש על ידי וורטקס או שאיבה הלוך ושוב ב-20 milliliters של מדיום BMMY, ולאחר מכן בצע סנטריפוגציה.לאחר שפיכת הנוזל העליון, השהה מחדש את משקע התאים על ידי ערבוב בוורטקס או שאיבה חוזרת בפיפטה עד להגעה ל-OD 600 של 1.0 בתווך BMMY, שהוא התווך להשראת הביטוי. העבר את התרבית לבקבוק עם מחיצות (baffled flask) בנפח של ליטר אחד וכסה את הבקבוק בביקר של 200 מיליליטר.אנו ממליצים מאוד להשתמש בבקבוקים עם מחיצות (baffled flasks) כיוון שהם מחדירים יותר חמצן לתרבית. עבור ביטוי חלבון יעיל במהלך השראת מתנול, יש להדגיר את הבקבוק באינקובטור כדי להמשיך את הגדילה ב-30 °C. חשוב שהטמפרטורה לא תעלה על 30 °C במקרה שהטמפרטורה באינקובטור שלכם תנודתית.הגדירו את הטמפרטורה ל-28 °C. הוסיפו מתנול טהור שעקר לריכוז סופי של 0.5% methanol מדי 24 שעות כדי לשמר את האינדוקציה. בנקודות זמן מסוימות לאחר תחילת הביטוי, העבירו 1 mL מהתרבית לשפופרת מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 mL וסובבו בצנטריפוגה ב-1300 Gs למשך 2.5 דקות. בטמפרטורת החדר, העבירו את העלייה (supernatant) לשפופרת מיקרו-צנטריפוגה נפרדת של 1.5 mL.יש לאחסן את העלייה והמשקעים התאיים בטמפרטורה של 80- מעלות צלזיוס עד לניתוח נוסף. הדגימות מנקודות זמן שונות ינותחו כדי לקבוע את פרק הזמן האופטימלי לביטוי חלבונים לאחר השראת הביטוי. כעת נציג מספר תוצאות מייצגות של ביטוי מוצלח של חלבונים רקומביננטיים תוך שימוש ב-PIA Pastis כמערכת מאכסנת.תמונת Western blot זו מציגה ארבעה חלבונים שהובעו לאחר 24 שעות של ביטוי. הנוגדן ששימש עבור ה-immuno blotting היה נוגדן acemic HRP. הנתיב השני הוא ביקורת שלילית ונטען בו על-נוזל (supernatant) מתאים של תאים שאינם מבטאים חלבון רקומביננטי מכיוון שהם עברו טרנספורמציה עם וקטור האב.הרגע הדגמנו כיצד לבטא חלבונים רקומביננטיים באמצעות המארח האיקריוטי PQ.Plus. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לוודא כי הרצף של הקונסטרוקט שלכם נסקר כדי לאשר שגן העניין שובט והמסגרת שלו נכונה, וכי כל הצלחות הפטריות והריאגנטים מוכנים לפני התחלת העבודה. כמו כן, חשוב להכין כמות מספקת של פלסמיד ליניארי כדי להשיג מספר גבוה של טרנספורמנטים לפני ביטוי החלבון באמצעות אינדוקציה במתנול. ודאו שאתם שוטפים היטב את משקע התאים כדי להסיר שאריות של גליצרול שעלולות לעכב את ביטוי החלבון.זהו זה. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסויים.

expression-recombinant-proteins-methylotrophic-yeast-pichia

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

התמרה חלבון ומאפשרת העברה ישירה של חלבונים פעילים ביולוגית לתוך התאים. בניגוד לשיטות קונבנציונליות כגון transfection DNA נגיפי או התמרה זו פרדיגמה פולשנית מאפשרת מניפולציה הסלולר היעילה ביותר באופן titratable עקיפת רעילות הסלולר את הסיכון של שינוי בשעור על ידי הנדסה גנטית קבע.

הנדסה Cell-חדיר חלבון

בעידן שאחרי האדם הגנומיקה, הזמינות של חלבונים רקומביננטיים של תצורות המקומיים הוא חיוני למחקר מבנית, תפקודית טיפולית ופיתוח. כאן אנו מתארים מבחן רחב היקף של ביטוי חלבונים מערכת עובריים אנושיים לתאי כליה 293T, שניתן להשתמש בהם כדי לייצר מגוון של חלבונים רקומביננטיים.

פלטפורמת ביטוי נוח כללי לייצור חלבונים המופרשים מ תאים אנושיים

ביטוי חלבונים רקומביננטיים על ידי מערכות יונקים הופך לשיטה אטרקטיבית לייצור קומפלקסים של חלבונים לביולוגיה מבנית. כאן אנו מציגים מערכת ביטוי פשוטה אך יעילה ביותר המשתמשת בתאי יונקים שגדלו בתרחיף לטיהור קומפלקסים של חלבונים למחקרים מבניים.

ביטוי חלבון רקומביננטי לביולוגיה מבנית בתאי ההשעיה HEK 293F: רומן וגישה נגישה

אנו מציגים כאן תיאור אחיד של טכניקות שיכולות לשמש לפיתוח, לשנות, לנהל, ולבדוק ביטוי חלבון Heterologous של boulardii Saccharomyces שמרים פרוביוטיים.

טרנספורמציה של שמרים פרוביוטיים ושחזור שלהם מרקמות העיכול החיסון בעקבות Gavage אוראלי עכברים

ייצור בקנה מידה מעבדתי של חלבונים אוקריוטיים עם שינוי מתאים לאחר התרגום מייצג מחסום משמעותי. להלן פרוטוקול חזק עם התבססות מהירה ותפנית לביטוי חלבון באמצעות מערכת ביטוי יונקים. מערכת זו תומכת בחומצות אמינו סלקטיביות, תיוג סלקטיבי של חלבונים ומודולטורים של מולקולות קטנות של הרכב הגליקן.

ביטוי תשואה גבוהה של חלבונים אנושיים רקומביננטי עם transfection חולף של תאי HEK293 בהשעיה

מערכות Nonlytic ביטוי תא חרקים הם מנוצלים לייצור, סחר / לוקליזציה הסלולר, וניתוח פונקציונלי חלבון רקומביננטי. כאן, אנו מתארים שיטות ליצירת וקטורי ביטוי והבעת חלבון חולפת עוקבת בשורות תא פרפראים זמינות מסחרי. שיתוף הלוקליזציה של aquaporins tabaci Bemisia עם חלבונים בסמן פלורסנטי התת-תאי מוצגת גם.

ביטוי חולף ואת סלולר לוקליזציה של חלבונים רקומביננטי תאים בתרבית חרקים

ניתוחים הביוכימי ומבניים של חלבונים glycosylated דורשים כמויות גדולות יחסית של דגימות הומוגנית. כאן, אנו מציגים שיטה כימית יעילה עבור גליקוזילציה בייעודי לאתר של חומרים מטוהרים של חיידקים על ידי מיקוד תיולים Cys תגובתי.

מכוונת ציסטאין תיולים במבחנה גליקוזילציה בייעודי לאתר של חומרים

שיטה זו בפעם הראשונה מתאר אמין הליכים ניסיוני לייצור חלבון רקומביננטי ללא מתנול inducible יעיל Pichia pastoris (Komagataella phaffii), העסקת היזמים מקור מוסדר פחמן P DCו- PDF  בניסויים בקנה מידה קטן תוך טיפוח פרמטרים ניתן לנטר באופן מקוון, והיא מיושמת הזנה מתמדת גליצרול.

ביטוי עצמאי מתנול Pichia Pastoris דה-דיכוי בטכנולוגיות

מערכת וקטור הביטוי של baculovirus (BEVS) היא פלטפורמה איתנה להקרנת ביטוי וייצור של חלבון ארגינין מתילטרנספראזים (PRMTs) שישמשו למחקרים ביוכימיים, ביופיזיים ומבניים. כמויות מיליגרם של חומר יכול להיות מיוצר עבור רוב PRMTs וחלבונים אחרים של עניין הדורש פלטפורמת ביטוי eukaryotic.

ייצור חלבוני PRMT רקומביננטיים באמצעות מערכת וקטור הביטוי של Baculovirus

שליטה אופטוגנטית בחילוף החומרים המיקרוביאלי מציעה שליטה דינמית גמישה על תהליכי תסיסה. הפרוטוקול כאן מראה כיצד להגדיר תסיסה מווסתת אור כחול לייצור כימי וחלבון בקנה מידה נפחי שונה.

תסיסה מבוקרת אור לייצור כימיקלים וחלבון מיקרוביאליים

פרוטוקול זה מתאר את השלבים החיוניים לביצוע קמפיינים לבחירת פני השטח של שמרים להעשרת וריאנטים חלבוניים הנקשרים לאנטיגן מעניין.

הנדסת חלבונים על ידי תצוגת פני שטח שמרים

למדו להביע חלבונים רקומביננטיים בשמרים Pichia pastoris באמצעות הכנת תאים אלקטרוקומפטנטים, טרנספורמציה ואנליזת Western blot. פרוטוקול זה מספק שיטה אמינה לחקר ביטוי חלבונים ופונקצייתם.

ביטוי של חלבונים רקומביננטי השמרים Methylotrophic Pichia pastoris

גלה סרטונים נוספים