Name: Dissection של ארגונית הקוטב Explants בעלי חיים מעוברים Xenopus laevis והרכבה של Assay הידבקות התא (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 21 s
Description: למדו טכניקת ניתוח של אקספלנטים מקוטב בעלי חיים מעוברי Xenopus laevis והרכבת מבחן הידבקות תאים. שיטה זו מאפשרת חקר מאפייני הידבקות תאים והתנהגות תאית בביולוגיה התפתחותית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

הכנת לשכות הדבקה (יום לפני ההזרקה / דיסקציה) Assay הדבקה צ&#39;יימברס אם יש לך מיקרוסקופ מתחם קונבנציונלי (מאתרת אופטי מעל הבמה), הוא ncecessary לבצע הדבקה נמוכה גובה קאמרית כדלקמן. אם באמצעות מיקרוסקופ הפוך אופטיקה, ואז &quot;NUNC Lab-Tek Coverglass החדרים&quot; יכול להיות בשימוש, לדלג על שלבים 1 - 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף אחד &quot;מבדד עיתונאים חותם סיליקון&quot; על פתק 40 x 24mm לכסות. היטב בעיתונות מבודדת להחליק את מכסה על benchtop נקי להסתכל מהצד השני כדי לוודא כי מבודדת מחוברת לחלוטין, ללא בועות אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: שים לתאי הידבקות בצלחת פטרי עם נייר זכוכית מסנן Whatman ו החיטוי במחזור יבש לעקר. מגניב אותם עד RT. </li></ol> ציפוי הקאמרית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים טיפה 200 מ&quot;ל של עבודה פתרון של cadherin (10mg/ml) או פיברונקטין (20mg/ml) על במרכז החדר הידבקות autoclaved, באמצעות טיפים צהוב sigmacoated. לדגור על RT במשך 4 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את הפתרון cadherin או פיברונקטין והעברת צינור 1.5ml. פתרון זה ניתן לעשות שימוש חוזר במשך השבועיים הקרובים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוותר 500ml של BSA 4% 1x MBS-H לחסום את החדר. לדגור על RT במשך שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את הפתרון BSA. שטפו את החדר עם 500ml של 1x MBS-H פעמיים. לאחר לשטוף את השני, ישאפו רוב MBS-H (לא לגמרי), ולאחסן במכל אטום על 4 º C. זה תא הידבקות טובה עבור 2 הבא - 3 ימים. </li></ol> Dissection ו דיסוציאציה של Explants שווי בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה עוברים מוזרק 0.1x MBS-H, בדילול מן 1x autoclaved MBS-H, כלא autoclaved בינוני מתישהו נושאת חיידקים קטן שיכול להפריע כובע התאים ניתק בעלי חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את agarose 1x בארת&#39; של צלחות CMF-MBS agarose צלחות עם מנות 60mm, לפחות כמספר במספר דגימות שלך. יוצקים autoclaved 1x MBS-H על צלחות 1x של בארת&#39;. עבור CMF-MBS צלחות, לשפוך 10 מ&quot;ל של CMF-MBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר עוברים הופכים בשלב 8.5, להתחיל לנתח את המכסים בעלי חיים צלחת בארת&#39; של 1x. 10-15 explants לכל דגימות הן בדרך כלל מספיק עבור ניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את הכובע explants חיה לצלחת CMF-MBS. דגירה explants עבור 45-60 דקות, עד explants הם ניתק לחלוטין. בהסתה עדין בתוך כל 15 דקות יעזור דיסוציאציה. </li></ol> הדבקה Cell Assay <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתזמן את התאים: לוותר 500ml של 1x MBS-H לחדר הדבקה מוכנים של השלבים בסעיפים לעיל, Assay לשכות הדבקה וציפוי הקאמרית. העברת כובע התאים ניתק חיה מהצלחת CMF-MBS לחדר הדבקה באמצעות P200 עם טיפים צהובים sigmacoated ו הקצוצות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: אם אפשר, בזהירות למצוץ את בינוני עד כ 2 / 3 ל באמצע הדרך, בלי לחשוף את התאים באוויר. מוסיפים בערך אותה כמות של טרי MBS-H, כדי לוודא בינוני מכיל מספיק Ca 2 + ו - Mg 2 +. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על RT עבור 45-90 דקות. בדוק את התאים מדי פעם כדי לראות אם הם מצרף אל פני השטח התחתון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו אתה יכול לקחת את התמונה של התאים תחת מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את תא הדבקה על זכוכית שקופית הרשת. יישר באחת הפינות של החדר הידבקות לפינה של השקופית הרשת. הרוזן ולהקליט את מספר התאים המחוברים לרשתות שונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים 1 ליטר של MBS-H בתוך דלי פלסטיק גדול (למשל, פלסטיק וכו &#39;). בעדינות את תא שקופיות הידבקות לתחתית הדלי. סובב אותו על שייקר מסלולית במשך חמש דקות במהירות נמוכה (50 - 60rpm). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את תא הידבקות בחזרה בשקופית רשת, יישור מאותה פינה של החדר לפינה אותו להחליק את הרשת, כפי שנעשה בשלב 5 של זה Assay, סעיף Cell הדבקה. ספירת התאים שנותרו מחוברים על הרשת באותו שיש לך לספור לפני הכביסה. חישוב אחוזי התאים נשארים צמודים לאחר הכביסה. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>1x MBS-H</td><td>בופר</td><td></td><td></td><td>Barth משופר&amp;rsquo;מצע: מתכון ל-1 ליטר: 5.14 גרם NaCl, 5 מיליגרם KCl, 0.2 גרם NaHCO3&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt; 0.2 g MgSO₄&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;&amp;#8226;7H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;60 מ"ג CaCl2&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;&amp;#8226;2H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;80 מ"ג Ca(NO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;)2&amp;#8226;4 שעות&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;38 גרם HEPES, בצורה חומצית (free-acid). כוון את ה-pH ל-7.4 באמצעות NaOH. בצע עיקור באוטוקלאב.</td></tr><tr><td>CMF-MBS</td><td>בופר</td><td></td><td></td><td>זהו Ca&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;/מגנזיום&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;גרסה נטולת MBS-H. מתכון ל-500 מ"ל: 2.57 גרם NaCl, 37.5 מ"ג KCl, 0.1 גרם NaHCO&lt;sub&gt;3/תת-מקטע&gt; 1.19 גרם HEPES, חומצה חופשית. כוונו את ה-pH ל-7.4 באמצעות NaOH. עקרו באוטוקלאב.</td></tr><tr><td>1% אגרוז/1x Barth&amp;rsquo;פלטות s</td><td></td><td></td><td></td><td>במספר השווה למספר הדגימות</td></tr><tr><td>צלוחיות אגרוז 1%/CMF-MBS</td><td></td><td></td><td></td><td>במספר השווה למספר הדגימות</td></tr><tr><td>כימרה של E-Cadherin/Fc </td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-2278</td><td>המס 0.1 מג של E-cadherin מוצק ב-100 מיקרוליטר של MBS-H בריכוז 1x המכיל 40% גליצרין, כדי להכין מלאי מאסטר בריכוז 100x (1.0 מג/מ"ל). אחסן אותו ב- &amp;#8211;20 &amp;deg;ג. הכין דילול של 1/100 עם MBS-H בריכוז 1x כדי להכין תמיסת עבודה בריכוז 10ug/ml רגע לפני השימוש. נדרשים 200ul מתמיסת עבודה זו לכל דגימה.</td></tr><tr><td>פיברונקטין, תמיסה בריכוז 0.1% </td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F-1141</td><td>ניתן להשתמש בתמיסה מוכנה זו כמלאי בריכוז 50x. הכינו דילול של 1/50 עם MBS-H בריכוז 1x, הכינו 20 מ"ל. &amp;mu;תמיסת עבודה בריכוז g/mL ממש לפני השימוש. דרושים 200 &amp;mu;L לדגימות של תמיסה עובדת זו. אני לא ממליץ להשתמש בפיברונקטין (Fibronectin) בצורה מוצקה, מכיוון שקשה להמיסו בריכוז של 0.1% כדי להכין את תמיסת המקור. למרות שעלותה גבוהה יותר, תמיסה מוכנה מראש בריכוז של 0.1% עדיפה כדי להשיג תוצאות עקביות.</td></tr><tr><td>4% BSA /MBS-H</td><td>בופר</td><td></td><td></td><td>BSA:molecular biology grade fraction V</td></tr><tr><td>טיפים צהובים בציפוי Sigmacote </td><td>כלי</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>זכוכית כיסוי מס' 1</td><td></td><td></td><td></td><td>40 מ"מ x 24 מ"מ או 60 מ"מ x 24 מ"מ</td></tr><tr><td>מבודד סיליקון לאטימה בלחיצה</td><td>כלי</td><td>Glace Bio-Labs</td><td>JTR20-2.5</td><td>עומק 2.5 ממ"ק x קוטר 20 ממ"ק</td></tr><tr><td>כיסוי זכוכית עם תא NUNC Lab-Tek</td><td>כלי</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-471</td><td>2 באריים/שקופיות</td></tr><tr><td>זכוכית עם סריג</td><td>כלי</td><td></td><td></td><td>או סריג ספירה (graticule) למספר תאים</td></tr></tbody></table>

dissection של ארגונית הקוטב explants בעלי חיים מעוברים xenopus laevis והרכבה של assay הידבקות התא

Dissection of Organizer and Animal Pole Explants from Xenopus laevis Embryos and Assembly of a Cell Adhesion Assay

וידאו זה מדגים את טכניקה המשמשת להכנת מארגן מוט explants חיים מעוברים Xenopus laevis, כולל שימוש בסכין גבה - כלי לנתיחה המקצועית עשוי גבה אחת. פרוטוקול להרכבת assay הידבקות ניתנת גם, אשר בדיקות נוכחות של מולקולות הדבקה המפתח הנוכחי על מארגן את פני השטח או מוט חיה התאים הם קריטיים להתפתחות תקינה.

Dissection של ארגונית הקוטב Explants בעלי חיים מעוברים Xenopus laevis והרכבה של Assay הידבקות התא

שלום, שמי סוצ'י אגאטה. אני פוסט-דוקטורנטה במעבדה של ד"ר קן צ'ו במחלקה לביולוגיה התפתחותית וביולוגיה של התא באוניברסיטת קליפורניה, ארווין. היום אדגים את הדיסקציה ובדיקת ההיצמדות (adhesion assay) של רקמה מבודדת מהכיפה החיצונית (animal cap explant) או מהמארגן (organizer explant) של עוברי צפרדע מסוג XUS.ניתן להשתמש בנוהל זה כדי לחקור את מאפייני ההיצמדות התאית ואת המורפולוגיה של תאים המופקים מרקמה שבוצעה לה דיסקציה. נוהל זה כולל דיסקציה של רקמה מסוימת מעובר של צפרדע מסוג xenopus, פירוק של התאים בתווך נטול סידן ומגנזיום, ולאחר מכן העברה של התאים המופרדים לתנאים המכילים סידן ומגנזיום על גבי זכוכית המצופה במולקולות היצמדות תאית. באמצעות נוהל זה, ניתן לחקור את התנהגות התאים, נדידת תאים ומאפייני היצמדות של הרקמה שבוצעה לה דיסקציה ב-Xenopus.במהלך כל הליך זה של דיסקציה של העובר ובדיקת היצמדות (adhesion assay), אני משתמש תחילה בכלים מיוחדים. זהו תמיסות 1x-bar, 1% agro sprayed, נטול סידן ומגנזיום. וכאן, זהו 1x-bar, 1% agro sprayed, שבו מבוצעת הדיסקציה של העובר.כעת זהו כלי ניתוח, כלי ניתוח מיוחד שאינו פינצטה. זה נקרא סכין גבות, שזהו שם מוזר, אך הוא למעשה עשוי ממשכי גבות המוסרים מהפנים. ולאחר מכן מדביקים אותו על קצה של פיפטת פסטה.והכלי הנוסף כאן נקרא hair loop (לולאת שיער), שזו שוב שיערה היוצרת לולאה בקצה הפיפטה. לא השתמשתי בכלי זה הפעם, אך ישנם אנשים המעדיפים את ה-hair loop על פני ה-eyeball knife לצורך ביצוע בדיקת היצמדות (adhesion assay). השתמשתי במבודד גומי סיליקון המודבק לחלק העליון של זכוכית השקופית כדי ליצור תא לבדיקת ההיצמדות.ראשית, הוצא את מעטפת הוויטלין (vine envelope) מהעובר. חלק זה הוא מעטפת הוויטלין. לאחר מכן, בצע דיסקציה של ה-ader בקוטב החייתי.זהו פרויקט בבעלי חיים, אינך זקוק לו. הפוך אתו של העובר ותראה את השפה הגבית השקופה כאן. זה מלהיב.לאחר מכן קחו סכין לדגימת גלגל העין, החדירו אותה לצד השפה הגבית (dorsal lip), החדירו גם את הצד השני וגזרו את החלק הזה ממש מתחת לשפה הגבית. חלק זה מכיל את האורגניסור (organizer) ואת העור (derm) שסביבו. הפכו את החלק הזה וקלפו את החלק הבטני מהאורגניסור הפנימי.אני. אוקיי, הרסתי במידה מסוימת את החלק העורי (dermal) אבל זה לא חשוב. אז זה בסדר. והחלק הזה בצד ימין הוא מדד הארגון.עברתי כעת לצד הנקי של הצלחת. החלק בצד ימין הוא חלק האורגנייזר, וזהו העובר השלם. כעת ניתן לראות מהו הגודל של חלק האורגנייזר.ניתן להשתמש בכך כדי להפיק גורם כלשהו המבטא את אזור המארגן, כדי ליצור CD של מארגנים בספרייה, או כדי לחקור את הטרמינולוגיה ברקמה מהגרת. לפני חיתוך ה-animal cap, יש למצוא את השלב המתאים. אנו משתמשים בעוברים בשלב 8 של הבלאסטולה.וכעת אנו רואים בתצוגה זו עוברים בשלושה שלבים שונים. שני העוברים בצד שמאל הם בשלב 7 בלאסטוצולה (blast), שני העוברים במרכז הם בשלב 8, ושני העוברים בצד ימין נמצאים כמעט בשלב 9, בלאסטוצולה מאוחרת.אנו מעדיפים להשתמש בשלב 8 (הבינוני), מכיוון שראשית, ניתן להבחין בהבדל ברור של כל בלאסטומר בקוטב החייתי. עובר בשלב 8 מספק שילוב טוב של גדלי תאים מתאימים וקלות לביצוע דיסקציה בהשוואה לשלב 7. בשלב 7, התאים בקוטב החייתי גדולים מדי ומספרם קטן מדי, בעוד שבשבב 9, כל תא קטן מדי, וכן רקמת האקטודרם של הקוטב החייתי הופכת דקה יותר מאשר בשלב 8.כדי שלא תקבלו כמות תאים גדולה מדי מכפי שתרצו. ראשית, הצמידו את הפינצטה לצד העובר והוציאו את מעטפת הוויטלין מהעובר. זוהי מעטפת הוויטלין.לאחר מכן מנתחים את מרכז הקוטב האנימלי אל מחוץ לעוברית. אוקיי, זוהי דגימה יפה. בצד שמאל נמצא הנתח של ה-animal cap והנה שאר העוברית.ניתן להשתמש בחלק זה, למשל, במקרה שבו מזריקים למקטע העוברי של העובר בשלב מוקדם יותר קונסטרוקט של גן Porto; לאחר מכן, בשלב מאוחר יותר, מבודדים חלק זה ומשתמשים בו לבדיקת Porto, כגון בדיקת הדדיות (reciprocate assay). כעת אבצע השתלה ואעביר את ה-explan של ה-organizer X כדי לבחון בדיקה של היצמדות תאים (cell adhesion assay). כדי לעשות זאת, עלי להפריד את תאי ה-explan של ה-organizer X בתוך מצע calcium mechanism 3.כעת אני מעביר את הארגניזורים (organizers) מבת Dish רגילה ל-Dish עם מצע נטול סידן ומגנזיום. כדי לעשות זאת, אם יש לכם יד מאוד יציבה, תוכלו להשתמש בפיפט העברה רגיל, אך קיים סיכוי מסוים לפגוע בעוברים במהלך הפעולה. לכן, מה שאני עושה בדרך כלל הוא להשתמש ב-P 200 עם טיפ צהוב.והטיפ הצהוב הזה קודד מראש עם הקוד הכימי הבודד הזה כדי למנוע מהתא להידבק לדפנות הטיפ הצהוב. כמו כן, חתכתי את הטיפ עם מספריים בקצה הטיפ הצהוב כך שהקצה הוא כעת קהה ובעל פתח רחב, כדי למזער את הסיכוי לפגוע ב-DX explan. אוקיי, כעת אתם רואים במבט את שני ה-organizer explan ואני עומד להעביר את שני החלקים הללו מהדיש הרגיל הזה לדיש עם תוצר של calcium mechanism free medium.שאבו lang-he slowly את החלקים הללו והעבירו אותם למצע נטול סידן ומגנזיום. כך הם נראים בתחילה, וכעת הם מתפרקים כמעט לרמה של תא בודד. כעת האקספלנטים המאורגנים נמצאים במצע נטול סידן ומגנזיום, ואני אדגיר אותם במצע נטול סידן ומגנזיום למשך שעה כדי לאפשר להם להתפרק לרמה של תא בודד, עבור השלב הבא במחקר המורפולוגיה או ההתנהגות של התאים. לאחר שעה של דגירה, התאים, כלומר האקספלנטים המאורגנים, אמורים להיות מופרדים.מצבם די טוב. וכעת הביטו במיקרוסקופים ובמיקרוסקופ. הם, כן, נראים די פעילים.כעת אני בוחן את התנהגות התאים בתא הדמיה על שקופית שקוּשרו באמצעות קדהרין (cadherin), INE או סוג אחר של מולקולת הידבקות תאית, כדי ליצור תא הדמיה להידבקות תאים. אני לוקח את השקופית ואת מבודד גומי הסיליקון, ומניח פשוט את מבודד גומי הסיליקון על פני השטח של השקופית ולוחץ בחוזקה כדי לוודא שהם נצמדים לכל היקף המעגל. לאחר מכן, אני בודק מהצד השני כדי לוודא שההצמדה מלאה, כך שהנוזל לא ידלוף מלמעלה.אל תוך תא חול זה אני שופך טיפה של 200 µL של תמיסת תאים, הסספנסיה המכילה חלבוני היצמדות תאים כמו cohering או fibronectin. לאחר מכן, אני חוסם את התא באמצעות 500 µL של 4% BSA. ואז אנו מחליפים את ה-BSA ב-1x PBS רגיל, תוך שימוש במדיום המתאים.וכעת נראה שיש כאן תא מוכן להעברת התא. את התא הזה, אני לוקח שוב, בעזרת P 200 עם טיפ צהוב קצוץ ומצופה ב-sigma code, ושואב את התא ממצע נטול calcium and magnesium לתא זה, המכיל את המצע שכולל גם calcium and magnesium. כעת, אני מעביר את ה-organizer X המפוצל באמצעות P 200.ראשית, מחדירים את ה-P 200 ושואבים באיטיות את התאים, ולאחר מכן ניתן להעביר אותם למעלה ולמטה בעדינות רבה. בשלב זה, אני מפזר את התאים לכל הכיוונים, אך כדי להבטיח שהם תאיים בודדים, ממקמים את תא הדמיה זה במרכז השדה ובשלב זה מפזרים את התאים בכל רחבי תא ההדמיה. כעת התאים מפוזרים על פני השטח המצופים.ובכן, בצינור העליון התאים נראים כך. לאחר שעתיים עד שלוש שעות של פריסת התאים אל תוך תא ההדבקה, אני סופר את התאים בתא זה באמצעות מיקרוסקופ זה. בדרך כלל, כאשר מנסים לחקור את ההדבקה של תאי איבר מתוך נתח איבר (explant), משאירים את התאים על גבי שקף מצופה למשך שעתיים עד שלוש שעות.לאחר מכן, ניתן לכמת את מספר התאים על השקופית תחת המיקרוסקופ כדי לשטוף. כדי לשטוף את התאים שאינם קשורים או שאינם דבקים, פשוט הניחו את מבחנת ה-Hessian בתוך דלי של תמיסת בופר, המכיל כמות גדולה של בופר. לאחר מכן, התחילו בערבול במהירות נמוכה מאוד, בערך 50 RPM, והמתינו חמש דקות.לאחר חמש דקות, הוצאו בזהירות את תא ההיצמדות (adhesion chamber) מבלי לחשוף את התאים שבתוכו. הוציאו אותו בזהירות באופן זה, לאחר מכן נגבו את עודפי התמיכה (buffer) ובחנו שוב תחת המיקרוסקופ כדי לספור איזה אחוז מהתאים נותרים צמודים למשטח המצופה. כעת, לאחר השטיפה, החזירו את תא ההיצמדות לאותה נקודה כדי לוודא שאתם צופים בדיוק באותו מיקום בתא ההיצמדות.וכעת נתחיל בספירה. במסך זה אני מציג שני סוגים שונים של תאים על אותו סוג של מולקולת הדבקה תאית. שני סוגי התאים הללו מראים מאפייני הדבקה שונים לחלוטין על אותו חלבון.על גבי אותו חלבון היצמדות תאיים. נוכל להשתמש גם בתאים אלו שהופרדו מהפתיל (explant) כדי לבחון את התנהגות ההתקבצות או הנדידה שלהם באמצעות דימוי במרווחי זמן (Time lapse imaging).

dissection-organizer-animal-pole-explants-from-xenopus-laevis-embryos

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Assay זה מעריך את היכולת של מולקולות איתות, עצם פה חלבון המוךפו"גנטי שהולך 7 (BMP7), לארגון מחדש של אקסונים commissural. Explant של חוט השדרה הגבי העובריים בתרבית הסמוכים המצרפי של הפרשת התאים COS הצמיחה גורמים מועמד. אקסונים commissural ההתמצאות גדל בתוך explant הם דמיינו ידי אימונוהיסטוכימיה.

Assaying את היכולת של מולקולות איתות Diffusible כדי כיוון מחדש עובריים האקסונים Commissural השדרה

בעלי חיים כמוסות overexpressing הגן המוצר (ים) שנמצאים מושתלים האגף...

רקמות קביעת שווי שימוש בבעלי חיים להשתלות (ACT) Assay ב Xenopus laevis</em

Xenopus עובריים epithelia הם מערכת מודל אידיאלי ללמוד התנהגויות התא כגון פיתוח הקוטביות ולשנות צורה במהלך המורפוגנזה אפיתל. היסטולוגיה מסורתית של דגימות קבוע ויותר כהשלמה הדמיה לחיות תאים confocal. כאן אנו מדגימים שיטות לבודד ברקמות הצפרדע לדמיין לתאי האפיתל לחיות לחיות cytoskeleton שלהם באמצעות תאים מיקרוסקופיה confocal.

Live-תא הדמיה וניתוח כמותי של תאים אפיתל עובריים ב Xenopus laevis</em

האאקטודרם Xenopus עובריים הפך מודל אטרקטיבי עבור מחקרים של הקוטביות בתא. Assay מתואר, שבה חלוקת subcellular של חלבוני ניאון נבחנת בתאים האאקטודרם. פרוטוקול זה יעזור כתובת לשאלות הקשורות שליטה מרחבית של איתות.

טרנסלוקציה מקוטב של חלבוני ניאון ב Xenopus האאקטודרם בתגובה איתות Wnt

תרבויות Explant עצביות מן<em&gt; Xenopus laevis</em

Xenopus laevis מספק מערכת מודל אידיאלית ללימוד מפרט גורל תא ותפקוד פיסיולוגי של תאי רשתית בודדים בתרבית תאים ראשוניות. כאן אנו מציגים טכניקה לביתור רקמות רשתית ויצירת תרביות תאים ראשוניות שהם צלמו לפעילות הסידן ונותחו על ידי כלאה באתר.

Dissection, תרבות וניתוח של<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; רקמת רשתית עוברית

פרוטוקול זה מתאר כיצד לנתח פסגת premigratory גולגולת עצבית (NC) מneurulas laevis Xenopus. יכול להיות מצופה explants אלה בפיברונקטין ותרבית במבחנה, או מורכב בחזרה לעוברי מארח. טכניקה זו מאפשרת חקר המנגנונים של מעבר NC האפיתל לmesenchyme, הגירה, ובידול.

Dissection של<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; העצבי קרסט עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; Explant תרבות או<em&gt; In vivo</em&gt; השתלות

כתב היד כאן מספקת מערכת פשוטה של שיטות לניתוח ההפרשה ודיפוזיה של ligands מתויג fluorescently ב Xenopus. זה מספק הקשר לבדיקת היכולת של חלבונים אחרים לשנות הפצת יגנד ומאפשר ניסויים שעשויות לתת תובנה מנגנוני ויסות הדרגתיים מורפוגן.

באמצעות ניתוח של Confocal<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; לחקירת מאפננים של עירובים מורפוגן Wnt וששש

בעוברי קסנופוס, תאים מגג הבלסטוקואל הם פלוריפוטנטיים וניתן לתכנת אותם ליצירת רקמות שונות. כאן, אנו מתארים פרוטוקולים לשימוש בצמחי גג בלסטוקואל דו-חיים כמערכת בדיקה לחקירת תכונות מפתח in vivo  ו-in vitro של התפתחות עצבית מוקדמת.

כמו תא גזע<em&gt; Xenopus</em&gt; Explants העובריים לחקר תכונות המוקדמות עצבי התפתחותית<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; In vivo</em

אנו מציגים פרוטוקול דו-חלקי המשלב הדמיה של סידן פלורסנט עם היברידיזציה באתרו, ומאפשר לניסויים לתאם דפוסים של פעילות הסידן עם פרופילי ביטוי גנים ברמה של תא אחד.

סידן פלואורסצנטי הדמיה ובעקבות היברידיזציה באתרו לאפיון עצבי בלתי מבשר בקספוס זריזה

אנו מתארים פרוטוקול פשוט לפתח אורגנואידים אפיתל mucociliary מתאי ectoderm עמוקים מבודדים מעוברי Xenopus laevis. האבות הרב-פוטנטיים מחדשים את מבשרי תא גביע האפיתל ומאפשרים מעקב חי אחר החניכה וההתקדמות של מעברי התא על פני השטח של אורגנואידים.

אורגנואידים אפיתל Mucociliary מתאי עובר קסנופוס: דור, תרבות והדמיה חיה ברזולוציה גבוהה

למדו טכניקת ניתוח של אקספלנטים מקוטב בעלי חיים מעוברי Xenopus laevis והרכבת מבחן הידבקות תאים. שיטה זו מאפשרת חקר מאפייני הידבקות תאים והתנהגות תאית בביולוגיה התפתחותית.

Dissection של ארגונית הקוטב Explants בעלי חיים מעוברים Xenopus laevis והרכבה של Assay הידבקות התא

גלה סרטונים נוספים