Name: Microinjection עוברים Medaka לשימוש כמודל אורגניזם גנטי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-22T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 25 s
Description: למד טכניקת מיקרו-הזרקה לעוברי מדקה בשלב התא האחד לחקר פונקציית גנים בביולוגיה התפתחותית. שיטה זו מאפשרת מניפולציה גנטית ישירה בחיים וניתוח שינויים מורפולוגיים ומולקולריים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מטעם MRC.

1. הזדווגות איסוף ביצים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Medaka נקבה וזכר יכולים בקלות להיות מכובדת על ידי גודל וצורה של סנפיר אנאלי הגבי. סנפירי האנאלי של הזכרים גדולים בצורת מקבילית בהשוואה לזו של הנקבות. סנפיר אנאלי הנשי הוא קטן בצורת משולש. סנפיר הגב זכר יש חריץ עמוק לעין בין שתי הקרניים האחרונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Medaka שכבו עד 40 ביצים כל יום ונקבות medaka לשאת ביצים התקבצו ליד הבטן שלהם על ידי חוטים מצורף במשך כמה שעות לפני שהם פשט על הצמחים באקווריום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקבות יכול להיות לכוד ברשת וקבע בתוך בעדינות משני הצדדים על ידי יד אחת. ביצים אז יכול להיות התגרו בעדינות מהבטן עם האצבע המורה של היד השנייה. הנקבה אז יכול להיות שב הטנק. ביצים יש להעביר צלחת פטרי 6 ס"מ מלאים התקשורת העובר על ידי מלקחיים קהה או אצבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זוגות Medaka נדירות להילחם כאשר הם מוחזקים בתוך קופסה קטנה ההזדווגות. לכן, הם יכולים להישמר טנק אחד קטן עם זרימת המים, כך שהם יכולים להיות מוזן וביצים ניתן לאסוף מזוג אותו כל יום במשך כמה חודשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשוב דג נקבה לא צריך להישמר ללא זכרים, שכן הביוץ מתרחש היומיום medaka נקבות. אחרת, הנקבות לא יכול לספק ביצים להיות ברע. </li></ol> 2. עוברים ניקוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת unclustered ביצים עם טפטפת זכוכית נייר זכוכית (p2000 בגודל חצץ, עמיד למים) להציב מכסה של צלחת פטרי 9cm. הסר בינוני עודף אלא להבטיח נפח מספיק נשאר כדי למנוע ייבוש של עוברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלגל בעדינות עוברים על נייר זכוכית בעזרת האצבע המורה, הפעלת לחץ מינימלי ושמירה במקביל אצבע על פני השטח של הנייר בחול כ 45-60 שניות כדי להסיר כמה שערות פני השטח החיצוני של סיסית. אין לגלגל יותר מ 5-7 עוברים מיד זהירות זו תצמצם את הסיכון של ריסוק עוברים מתחת לזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת עוברים ניקוי לצלחת טרי בינוני העובר. </li></ol> 3. ביצוע צלחות agarose לקיום עוברים במהלך microinjection עוברים מוחזקים שקתות במהלך ההזרקה עשה עם עובש פרספקס agarose ב -1.5% (איור 1). ריכוז agarose חשוב להחזיק עוברים כראוי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית, ליצור מסגרת של agarose להחזיק את התבנית פרספקס. יוצקים agarose 1.5% במים עד לעומק 0.5cm בצלחת פטרי 9cm ולחכות עד שהוא מתקשה לחלוטין. לגזור על שטח של agarose רק גדול יותר בגודל של התבנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים 1.5% agarose כדי למלא את שטח חתך מקום עובש כך שאין בועות לכודים ולהמתין עד agarose מתמצק. צלחת זו agarose ניתן לאחסן במקרר כדי לזרז solidifaction. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציאים את התבנית כדי ליצור שקתות להחזיק את הביצים. הוסף בינוני העובר מספיק כדי לטבול את התבנית, מכסים ומאחסנים ב 4 מעלות צלזיוס עד הצורך. <img src="/files/ftp_upload/1937/1937fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. סכמטי של עובש מחוייט המשמשים להכנת שקתות בצלחות agarose עבור microinjection. </li></ol> 4. Microinjection עוברים medaka ב medaka, DNA, RNA, oligonucleotides morpholino וצבעים נותב הם microinjected דרך סיסית לתוך הציטופלסמה של 1 עד 64 תאים בעובר בשלב במקום חלמון כמו דג הזברה. מאז הציטופלסמה קטנה יותר לעין ופחות medaka, בפועל על ידי הזרקת צבעים כגון rhodamine-dextran מומלץ לפתח את המיומנות הזאת. תוספת של פנול אדום כמו נותב הוא מעודד גם כדי לאפשר אישור של זריקות. ככל סיסית שמסביב עוברים medaka קשה, מחט קצרה, הזרקה חזקה רחב נדרשת (איור 2). הכן זה מחט חזקה הזרקת רחב של כוס חוט המכילים נימי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון זריקה עם פנול אדום כמו נותב ו לטעון אותו לתוך המחט מאחור עם microloader Eppendorf. חבר את המחט על משאבת אוויר מזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצים יש לאסוף unclustered בהקדם האפשרי לאחר ההפריה להזריק בשלב אחד התא. עוברים עוד ניתן להזריק ידי אחסונם על הקרח (לא יותר מ 30 דקות) כדי למנוע חלוקת התא. <img src="/files/ftp_upload/1937/1937fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. השוואה בין מחטים medaka ו דג הזברה. הערה קצה המחט MF (למעלה) הוא קצר יותר ולכן חזקה ניקוב סיסית קשה שמסביב עוברים medaka. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת ביצים לתוך הצלחת agarose וליישר אותם שקתות עם מלקחיים. ממש לפני ההזרקה, חמש ביצים יש לסובב כך קרום התא הציטופלסמה של תא אחד יכול להיות נפגע על ידי הדואר המחט בניצב. הציטופלסמה של תא אחד לא ניתן למצוא על ידי מחפש שטח נטולי טיפות שמן קטן שנמצא מול הצד של הביצה עם טיפות שמן הצפופים. האזור זיהו ניתן לאשר להיות בציטופלסמה ידי הצגת מהצד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקמו את המחט קרוב את הביצים. פתח את קצה המחט על ידי נוגע בעדינות את קצה המחט אל סיסית או באמצעות microforceps (איור 3). כמות קטנה של חומר הזרקה יש לראות לזרום החוצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנקב דרך סיסית למקום קצה של מחט בתוך סיסית. התאם את הלחץ החזקה של מזרק להיות גבוה יחסית, כדי להבטיח ריפלוקס לא מתרחשת עקב הלחץ הגבוה על לנקב דרך סיסית הקשה (הגדרות של 80 100hPA ללחץ החזקת 500-700hPA ללחץ הזרקה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את קצה המחט לתוך הציטופלסמה באמצעות חדה תוקע הקרום שלה. הימנע החדרת קצה המחט בחלמון. שלא כמו דג הזברה, החומר מוזרק לתוך החלמון לא יועברו לתוך הציטופלסמה. נוזלים מוזרקים יש גבול ברור כאשר הוא מוזרק לתוך החלמון ואילו הגבול מטושטש כאשר בציטופלסמה (איור 4). מדי פעם המחט עשוי להיחסם על ידי agarose / פסולת. מלקחיים ניתן להשתמש לגעת / rebreak סוף המחט ולהסיר את החסימה. אם המחט שוברת בכל נקודה במהלך ההזרקה, מבעבע יהיה לראות את העובר בינוני לבין חומר שאתה הזרקת יאבדו. זריקות צריך להתבצע באופן שיטתי מלמעלה למטה לאורך תעלות agarose ו משמאל לימין על פני התבנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עוברים מוזרק יש להעביר צלחת נקייה המכילה בינוני העובר ופיתח בטמפרטורה המתאימה. <img src="/files/ftp_upload/1937/1937fig3.jpg" alt="איור 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 3"> איור 3. שוברים את קצה המחט לפני ההזרקה. 1: העבר קצה המחט קרוב סיסית של העובר; 2: גע סיסית ולהעביר מחט בעדינות קדימה ואחורה כדי לשבור קצה; 3: כאשר כמות קטנה של חומר הזרקה זורם מתוך בסופו של המחט זו מאשרת שבירה של קצה. </li></ol> 5. נציג תוצאות <img src="/files/ftp_upload/1937/1937fig4.jpg" alt="איור 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 4"> איור 4. תמונות נציג מוזרק עוברים medaka. לוח מראה תמונה מייצגת של הזרקה נכונה של rhodamine-dextran לתוך הציטופלסמה של תא אחד עובר שלב medaka. לוח ב 'מציג תמונה מייצגת של הזרקה שגויה של rhodamine-dextran לתוך שק החלמון של העובר חד תא הבמה medaka. לוחות C ו-D להראות את העוברים מקולטי A ו-B בהתאמה על כ 30 שעות לאחר ההזרקה. א.מ.: העובר, הקדמי הוא כלפי מעלה לוחות C ו-D ולהציג היא הגב. הערה על הגוף של העובר בלוח D הוא לא אדום כמו צבע היה מוזרק בצורה לא נכונה לתוך שק החלמון. חצים ב B ו-D עולה rhodamine-dextran מוזרק בצורה לא נכונה לתוך שק החלמון לציין את הגבול מעגלי מובהק. קווים מקווקווים ב A ו-B עולה קווי המתאר של הציטופלסמה של תא אחד, הוא להציג לרוחב.

<ol><li>Furutani-Seiki, M., Sasado, T., Morinaga, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+genome-wide+screen+for+mutations+affecting+organogenesis+in+Medaka%2C+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">A systematic genome-wide screen for mutations affecting organogenesis in Medaka, Oryzias latipes.</a> Mech Dev. 121, 647-658 (2004).</li>
<li>Furutani-Seiki, M., Wittbrodt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medaka+and+zebrafish%2C+an+evolutionary+twin+study%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Dev%22%5BJournal%5D)">Medaka and zebrafish, an evolutionary twin study.</a> Mech. Dev. 121, 629-6237 (2004).</li>
</ol>

בסרטון הזה, אנחנו מראים שיטה נותב התא, ה-mRNA, ה-DNA או oligonucleotide אנטי תחושה זריקה לתוך אחד התאים בשלב עוברי medaka. טכניקה זו אפשרה לנו לבחון תהליכים התפתחותיים שונים ב-vivo בזמן אמת. תהליך זה לבין ניתוח מפורט בהמשך היא מספקת יש פוטנציאל לשפר באופן משמעותי את הבנתנו organogenesis החולייתנים לבין ביולוגיה של התא הבסיסי. ידע כזה עשוי להיות חשוב, ואת התשואה יישומים טיפולית רפואה רגנרטיבית.

<table><tbody><tr><td>רשת דקה 4&quot;</td><td>כלים</td><td>J K Aquatics Ltd.</td><td>MD001</td><td>משמשת לתפיסת דגים במהלך איסוף ביצים.</td></tr><tr><td>תווך עוברי</td><td>ריאגנט</td><td>הכנה עצמית</td><td></td><td>200ml תמיסת מלאי 50X, 1ml 1%methyleneblue ב-H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O/10 ליטר מי RO (תמיסת מלאי 50X: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 2H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O 2.4g, MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; 7H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O 4.0g/1 ליטר מי RO.</td></tr><tr><td>נייר זכוכית עמיד במים דק - גרעיניות p2000</td><td>כלים</td><td>Hermes Abrasives Ltd.</td><td></td><td>גרעיניות דקות מאוד עבור גלגול/ניקוי עובריים עם קוריון.</td></tr><tr><td>קפילריות זכוכית בורוסיליקט</td><td>כלי</td><td>Harvard Apparatus</td><td>GC100-10F</td><td>ליצירת מחטי מיקרו-הזרקה.</td></tr><tr><td>מכשיר משיכת מיקרו-פיפטות</td><td>ציוד</td><td>Narishige International</td><td>Model PP-830</td><td>ליצירת מחטי מיקרו-הזרקה.</td></tr><tr><td>מיקרו-לודר של Eppendorf</td><td>כלי</td><td>Eppendorf</td><td>5242956.003</td><td>לטעינת מחטי מיקרו-הזרקה.</td></tr><tr><td>מערכת מיקרו-הזרקה</td><td>ציוד</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>דגם 5242.</td></tr><tr><td>מיקרו-מניפולטור</td><td>ציוד</td><td>Narishige International</td><td></td><td>דגם MN151.</td></tr><tr><td>פלטת הזרקה מאגרוז</td><td>כלים</td><td>הכנה עצמית</td><td></td><td>להחזקת עובריים במהלך ההזרקה.</td></tr></tbody></table>

microinjection עוברים medaka לשימוש כמודל אורגניזם גנטי

Microinjection of Medaka Embryos for use as a Model Genetic Organism

בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את הטכניקה של microinjection לאחד תאים בשלב עוברי medaka. Medaka הוא דג קטן ההטלה מים מתוקים המאפשר ניתוח הן גנטיות העוברית הוא אחד היצורים מודל חוליות שבו הגנום כולו פנוטיפ מונחה מסכי מוטציה בוצעו 1, כמו דג הזברה והעכבר. החפיפה סטייה תפקודית של גנים הקשורים בין medaka ו דג הזברה מאפשר זיהוי של פנוטיפים רומן כי הם ניתנים לזיהוי ב זן יחיד 2, ובכך medaka ו דג הזברה משלימות לניתוח גנטי של פונקציות הגנום החולייתנים. כדי לנצל את הדגים medaka אשר עוברים הם שקופים ולפתח חיצונית, microinjection היא טכניקה חיונית להזריק תא קליעים נותבים עבור תאים, mRNAs תיוג או תחושה אנטי oligonucleotides במשך-לבטא ו דפיקות מטה הגנים של עניין, DNAs להכנת מהונדס הקווים.

Medaka ו דג הזברה משלימות לניתוח גנטי של פונקציות הגנום החולייתנים. פרוטוקול זה מדגיש את נקודות המפתח עבור microinjection מוצלח לעוברי medaka, טכניקה חשובה לניתוח העוברית ואת גנטי באמצעות medaka ו דג הזברה במעבדה.

Microinjection עוברים Medaka לשימוש כמודל אורגניזם גנטי

בסרטון זה, אנו מדגימים את טכניקת המיקרו-הזרקה לעוברים של דגי מדקה (medaka) בשלב התא הבודד. המדקה הוא דג מים מתוקים קטן המטיל ביצים, המאפשר...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לקבוע את תפקוד החלבון של הגן על ידי שיבוש דפוסי הביטוי הרגילים של הגן או החלבון הנבדקים. דבר זה מושג תחילה על ידי הכנת תבנית ה-aros ומחטי ההזרקה. השלב השני של הפרוצדורה הוא איסוף עוברים של mid בשלב התא הבודד.השלב השלישי של הפרוצדורה הוא הכוונת עוברים בשלב תא אחד למצב הנכון להזרקה. השלב הסופי של הפרוצדורה הוא הזרקת סמני תאים (cell tracers), mRNAs, או אוליגונוקלאוטידים אנטי-סנס לעוברי midar בשלב תא אחד. לבסוף, ניתן להפיק תוצאות באמצעות תצפית מיקרוסקופית המראה שינויים מורפולוגיים, פיזיולוגיים או מולקולריים הקשורים לחלבון שמושפע מהחומר שהוזרק.שלום, אני שון ברזינסקי מהמעבדה של ד"ר מקוטו סקי במחלקה לביולוגיה וביוכימיה באוניברסיטת באת. אני חבר במעבדת סקי. היום נדגים לכם פרוצדורה להזרקה מיקרוסקופית של סממנים תאיים, mRNA ואוליגונוקלאוטידים אנטי-סנס לעוברים של Meca.אנו משתמשים בנוהל זה במעבדה שלנו כדי לחקור את תפקודו של הגן הנחקר in vivo ברמת התא הבודד. לכן, בואו נתחיל. בניגוד לדגי זברה, ניתן להבחין בקלות בין זכרים לנקבות של maka באמצעות הסנפירים הדימורפיים שלהם.לסנפירים של הנקבות יש צורה עגולה עם שוליים חלקים. הן הסנפיר האנאלי והן הסנפיר הגבי של הזכר גדולים יותר מאלו של הנקבה, ובסנפיר הגבי ישנו שקע עמוק בין שתי הקרניים האחרונות. יש להחזיק זוג המבטיח התרבות של meca באקווריום להתרבות עם או ללא זרימת מים.ניתן לשמור את ה-P במיכל עם מים זורמים למשך עד חודשיים. להזרקה יומית, המקה עשויה להטיל עד 40 ביצים מדי יום, המתקבצות בבטן באמצעות סיבי היצמדות. השתמשו ברשת כדי לתפוס ולהוציא נקבה מהמיכל והחזיקו את הדג ביד אחת כדי לאבטחו בתוך הרשת. הפרידו בעדינות את הביצים באמצעות האצבע המורה.החזירו את הנקבה למכל. השתמשו בפינצטה או באצבע המורה כדי להעביר את הביצים לצלחת פטרי בקוטר ששה סנטימטרים הממולאת בתווך לעוברים. תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי, השתמשו בשני זוגות פינצטות כדי לחתוך את סיבי ההיצמדות ולהפריד את הביצים מהצבר.העבירו עוברים באמצעות פיפטת פסטה כדי להפרידם מצואה ואצות, והעבירו מקסימום 40 ביצים לצלוחית עם Medium עוברים טרי. הניחו את הביצים על קרח אם ההזרקה המיקרוסקופית תבוצע באופן מיידי. לחלופין, ניתן לשלוט על מהירות ההתפתחות לשלבים מאוחרים יותר באמצעות שינויים בטמפרטורת הדגירה.נדרשת תבנית פלקסגלאס להכנת פלטות אגרוז להחזקת עוברים במהלך ההזרקה. לעיון בפרטים, ראו את החלק הכתוב של פרוטוקול זה. שפכו 0.5 centimeters של 1.5% agarose במים לתוך צלחת פטרי של תשעה centimeters.כאשר ה-aase התמצק, גזרו שטח הקטן מעט מהתבנית כדי שהתבנית לא תשקע לתחתית. בנו את השטח הגזור עם עוד 1.5% aase והניחו מעליו את תבנית הפלקסיגלס. הימנעו מהחדרת בועות אוויר כאשר ה-Aris התמצק.באופן כללי, שחררו את התבנית כדי ליצור תעלות. כסו את ה-Aris במצע לעוברים. כסו את הצלחת ואחסנו בטמפרטורה של ארבעה מעלות Celsius עד למועד השימוש.הכינו מחט הזרקה רחבה וחזקה מסיב המכיל קפילרה מזכוכית. השתמשו במיקרו-טוען (micro loader) כדי למלא את מחט ההזרקה בתמיסת הזרקה, הכוללת phenol red כסמן, וחברו את המחט למעמד הזרקה עם משאבת אוויר. הציבו את המערכת לצד מיקרוסקופ דיסקציה.העבירו ביצים בשלב ההתפתחות המתאים לצלחת ההזרקה. ניתן לשמור את העוברים על קרח למשך עד 30 דקות כדי לעצור את ההתפתחות בזמן ביצוע ההזרקה תחת מיקרוסקופ סטריאו. השתמשו בפינצטה כדי לסדר שבע עד 10 ביצים בכל תעלה.סובב את הביצים כך שמחט ההזרקה יפגע בביצים בניצב. התא הבודד של העובר נמצא מול טיפות השמן. לכן, יש לכוון את טיפת השמן שמאלה, כך שהתא הבודד יהיה מימין לצורך ההזרקה.חומצות גרעיניות וצבעי סמן מוזרקים במיקרו-הזרקה דרך ה-Corian אל ציטופלזמה של העובר ולא אל החלמון. עבור דגי זברה, קרבו את המחט אל הביצים. געו עם קצה המחט ב-Corian או השתמשו בפינצטה מיקרוסקופית כדי לפתוח את קצה המחט, כך שכמות קטנה של תמיסת ההזרקה תזרום החוצה מקצה המחט.יש לשבור שוב את המחט במקרה של חסימה, לנקב את ה-Corian ולהזיז את קצה מחט ההזרקה מעט אל תוך השכבה הפנימית כדי להפחית את הסבירות לרפלקס אל תוך המחט. יש לכוונן את לחץ ההחזקה של המזרק בחדות לכ- 80 עד 100 hectare Pascals. יש לנקב את הממברנה ולהחדיר את המחט אל תוך הציטופלזמה.הזריקו את העובר. התבוננו בעובר מהצד כדי לוודא פיזור אחיד של החומר המוזרק בתוך הציטופלזמה. לנוזלים שהוזרקו בצורה נכונה לתוך הציטופלזמה יש גבול מטושטש; חומר שהוזרק עמוק מדי לתוך החלמון יהיה בעל גבול ברור ולא יעבור לציטופלזמה.העבירו את העוברי המהוצנים לצלוחית נקייה המכילה תווך גידול לעוברים ואפשרו להם להתפתח לפי הצורך באינקובטור בטמפרטורה מתאימה. פאנל A מציג תמונה מייצגת של הזרקה נכונה של rumine dextran לתוך הציטופלזמה של עוברי Meca בשלב תא אחד. פאנל B מציג תמונה מייצגת של הזרקה שגויה של rumine dex str לתוך שקיק החלמון של עוברי Meca בשלב תא אחד. קוים מקווקוים מציינים את קווי המתאר של הציטופלזמה של תא אחד.פאנלים C ו-D מציגים את העוברים מהפאנלים A ו-B בהתאמה, כ-30 שעות לאחר ההזרקה. שימו לב שגוף העובר בפאנל D אינו אדום מכיוון שהצבע הוזרק בטעות לשקיק החלמון. הרגע הצגנו לכם כיצד לבצע מיקרו-הזרקה של חומצות גרעיניות או סמנים לשלב התא הבודד של עוברים כהים יותר.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב להשתמש בעוברים שנמצאים בשלב התפתחותי נכון כדי להבטיח הזרקה מוצלחת. זהו כל התהליך. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

microinjection-of-medaka-embryos-for-use-as-a-model-genetic-organism

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Microinjection היא שיטה מבוססת ויעילה החדרת חומרים זרים לתוך עוברי דג הזברה מופרית. כאן, אנו להפגין טכניקה microinjection חזקים לביצוע overexpression mRNA, ואת הגן morpholino oligonucleotide מציאה מחקרים דג הזברה.

Microinjection של mRNA ו oligonucleotides Morpholino antisense עוברי דג הזברה.

וידאו זה מראה כיצד morpholino או mRNA יהיה ניתן להזריק לתוך עוברי דג הזברה בשלב אחד התא כדי להגדיל או להקטין את רמת המוצרים גן מסוים במהלך ההתפתחות הבאים.

Microinjection של עוברי דג הזברה לנתח פונקציה ג&#39;ין

בשל סיסית הקשיח עוברים רך, מניפולציה של עוברים medaka מעורב יותר מאשר דג הזברה. וידאו זה מציג צעד אחר צעד נהלים כיצד לתפעל עוברים medaka, כולל dechorionation, גובר agarose עבור הדמיה השתלת תאים לייצור מפלצות. נהלים אלה הם חיוניים כדי להשתמש medaka ו דג הזברה במעבדה כדי לנצל את מלוא היתרונות של התכונות המשלימות שלהם לנתיחה הגנטי של פונקציות הגנום החולייתנים.

Dechorionation עוברים Medaka והשתלות Cell עבור דור של מפלצות

סרטון זה מתאר טכניקה של מיקרו-הזרקה של עוברים כדי להעביר תרכובות לתוך שק החלמון של דג הזברה.

מיקרו-הזרקה עוברית: טכניקה להעברת תרכובת לחלמון דג הזברה

Microinjection הוא טכניקה נפוצה בשימוש כדי לספק בונה DNA, mRNAs, אנטיסנס morpholino או טיפולים אחרים לביציות, עובר, ותאים של מינים שונים.

התפוקה microinjections גבוה של zygotes קיפודי הים

שיטות המייצרות עוברי morphant חיוניות ללמוד מנגנוני התפתחות ורשתות רגולציה גן. כוכב הים Patiria miniata הוא מערכת מודל מתעורר ללימודים אלה. כאן אנו מציגים פרוטוקול לקבלת תאי רבייה, בהפקת תרבויות של עוברים, וmicroinjection המהיר של zygotes ממין זה.

שיטה לMicroinjection של Minata Patiria Zygotes

זבוב הפירות הים תיכוני (Diptera: Tephritidae) הוא מזיק חקלאי עולמי. הבנה מעמיקה יותר של הביולוגיה שלו היא המפתח לשליטה באוכלוסיות הזבוב הים-תיכוני ובכך להפחית את ההשפעה הכלכלית. מיקרו-הזרקת עובר היא כלי בסיסי המאפשר הן טרנספורמציה של קו הנבט והן מחקרי גנטיקה הפוכה במין זה.

משלוח חומצות גרעין דרך Microinjection העובר חרקי ההדברה החקלאיים ברחבי העולם,<em&gt; זבוב הפירות הים תיכוני</em

דגי מעבדה קטנים הפכו למודלים פופולריים לחקר עצמות על המנגנונים העומדים בבסיס הפרעות בעצמות אנושיות ולסינון תרופות מווסתות עצם. בדוח זה, אנו מתארים פרוטוקול להערכת ההשפעה של אלנדרונאט על תאי עצם בזחלי מדקה עם נגעים אוסטאופורוטיים.

ותרופות טיפול<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של אוסטאובלסטים-osteoclast אינטראקציות במודל אוסטאופורוזיס Medaka דגים

פרוטוקול microinjection פשוטה ויעילה לעריכה ג'ין ב ערוץ שפמנון עוברי באמצעות מערכת CRISPR/Cas9 מוצג. ב פרוטוקול זה, מדריך RNAs, חלבון Cas9 היו microinjected לתוך החלמון של תא אחד העוברים. פרוטוקול זה אומתה על ידי לדפוק שני גנים הקשורים החיסון ערוץ שפמנון.

Microinjection CRISPR/Cas9 החלבון לתוך ערוץ שפמנון, Ictalurus punctatus, העוברים עבור ג'ין עריכה

מאמר זה מתאר שתי שיטות מהירות ויעילות לאיסוף זרע מדאקה דג מודל קטן (Oryzias latipes), כמו גם פרוטוקול להערכה אמינה של איכות הזרע באמצעות ניתוח זרע בעזרת מחשב (CASA).

איסוף זרע וניתוח זרע בעזרת מחשב במודל הטלוסט מדאקה היפנית (Oryzias latipes)

למד טכניקת מיקרו-הזרקה לעוברי מדקה בשלב התא האחד לחקר פונקציית גנים בביולוגיה התפתחותית. שיטה זו מאפשרת מניפולציה גנטית ישירה בחיים וניתוח שינויים מורפולוגיים ומולקולריים.

Microinjection עוברים Medaka לשימוש כמודל אורגניזם גנטי

גלה סרטונים נוספים