28 באפריל 2007
השיטה הנוכחית מאפשרת cryostat לשחזור של חתך, קשה לניהול, חתיכות קטנות רקמות, כגון ביופסיה, פרוסות המוח. אנו מנצלים אלומיניום פשוט מקפיא הבמה כדי להקל על הטיפול רקמות cryostat רגיל שגרתי לייצר חלקים 5-10 מיקרון סדרתי של פרוסות 400 מיקרון עבה המוח.
שלום, שמי ג'ון פארק, עמית מחקר בבית הספר לרפואה של הרווארד ובנוסף אני סטודנט לרפואה (MD) במכללה לרפואה של אוניברסיטת Y, בית החולים סוברנס, דרום קוריאה. אלו הם חומרים להכנת חיתוכים דקים של דגימות פרוסות. אני מכין תבנית מסרט עבור פלטפורמת OCT.
אני יוצקת OCT ומקפיאה בתוך קריוסטט או משתמשת בקרח יבש גרוס להסרת ה-TAFE מסביב לפלטפורמת ה-OCT הקפואה. אני מראה את סימני היישור על גיר ההקפאה ובבמת ההרכבה של הקריוסטט ונועלת את הגיר. אני מבצעת חיתוך (sectioning) דרך פלטפורמת ה-OCT.
פני השטח של האונטריו שטוחים. אני מסיר את פלטפורמת ה-OCT שעברה פני שטח ומניח אותה על שלב ההקפאה של הקריוסטט. אני מניח דגימה זו ב-OCT, ודגימה זו נשמרה קודם לכן בקריו-שימור עם 30% glycerol או סוכרוז ב-PBS.
זהו השלב להכנת עמודת ההקפאה עם טבעת חיצונית הבולטת כ-5 מילימטרים מעל לקצה העמודה, כדי ליצור באר עבור ה-OCT. אני מניח בזהירות את דגימת הרקמה במרכז פני העמודה ומוסיף לאט OCT עד שהבאר מתמלאת. אני מקיף את עמודת ההקפאה בקרח יבש גרוס.
הרקמה וה-OCT צריכים לקפוא לחלוטין תוך 20 עד 60 שניות. ככל שההכנה עולה בטמפרטורה, ניתן להסיר את הטבעת החיצונית בעוד הדגימה נשארת קפואה. זהו השלב להזזת דגימת עמוד הקירור הצידה והנחתה בתוך הקריוסטט.
אני מניח טיפה של OCT על פני פלטפורמת ה-OCT וממקם את הדגימה תוך הפעלת לחץ; הדגימה תקפא במהירות על פלטפורמת ה-OCT. זהו שלב קיבוע הדגימה לבמה של הקריוסטט כאשר הסימנים מיושרים. אני מבצע חיתוכים דרך ה-OCT השטחי לדגימת הרקמה.
אני מעביר חתכים דקים של דגימות למשטחי זכוכית ומאחסן אותם בהקפאה או בטמפרטורת החדר; ניתן לבצע את התגובות עבור רקמות המקובעות על משטחי זכוכית. ניתן לנער בעדינות את המשטח לאחר משיכת الريאגנט אליו, וניתן לכסות אותו אם הוא רגיש לאור. שלבים הבאים של התגובה מבוצעים בקלות על ידי השלכת המשטח למכל הפסולת, שטיפת המשטח, ולאחר מכן יישום השלב הבא.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
שיטה זו מאפשרת חיתוך שחזר לפני של דגימות רקמה קטנות ומאתגרות באמצעות קריוסטט, כולל ביופסיות ופרוסות מוח. היא עושה שימוש במבנה הקפאה פשוט מאלומיניום לטיפול קל יותר ברקמה ובקריוסטט סטנדרטי כדי להפיק חיתוכים סדרתיים של 5-10 microns מפרוסות מוח בעובי של 400 micron.
שיטה זו נותנת מענה לאתגר של טיפול בדגימות רקמה קטנות ושבירות במחקר במדעי העצבים, על ידי אפשור חיתוך תחלילי דק וניתן לשחזור לצורך אנליזה אימונוהיסטוכימית בהמשך התהליך. היא תומכת בתיקוף מטרות ובצמצום סיכונים מכניסטיים באמצעות אספקת תוצאים היסטולוגיים עקביים מאזורי מוח שאופיינו בשיטות אלקטרופיזיולוגיות. גישה זו מגבירה את הביטחון החזוי במודלים פרה-קליניים על ידי שיפור איכות הנתונים המופקים מכמויות רקמה מוגבלות.
השיטה משתלבת ברצף הגילוי על ידי תמיכה באישור היסטולוגי בעקבות סריקה תפקודית בהpreparations של פרוסות מוח.