Orthotopic אבי העורקים להשתלות: מודל עכברוש לחקר התפתחות vasculopathy כרונית

המטרה הכללית של הליך זה היא לבסס מודל מדויק ושיטה בת feasible לבחינת התפתחות של וסקולופתיית השתלה. דבר זה מושג באמצעות שימוש בשילוב זני PVG ו-CI. השלב השני של ההליך הוא קצירת האורטה של התורם.

השלב השלישי של הפרוצדורה הוא הכנת המקבל. השלב האחרון של הפרוצדורה הוא ביצוע אנסטומוזה בין האורטה של התורמה לאורטה של המקבל. לבסוף, ניתן לקבל תוצאות המראות היווצרות של נאו-אינטימה (neointima) באמצעות היסטופתולוגיה.

שלום, אני סוניה שוואפל, פרופסור לאימונולוגיה של השתלות במעבדת Thet Eye במרכז הלב האוניברסיטאי בהמבורג, גרמניה. ואני מניש דובוף, גם אני ממעבדת TS Eye.

המעבדה שלי מתעניינת באימונולוגיה של השתלות. בסרטון זה נציג בפניכם את מודל ההשתלה האורטוטופית של אבי העורקים, מודל פשוט ותקף לחקר התפתחות של וסקולופתיה לאחר השתלה בעכברים. אנו משתמשים בהליך זה במעבדה שלנו כדי לחקור דחייה כרונית בהשתלות קרדיווסקולריות.

במודל השתלת אבי העורקים האורתוטופית, ניתן להעריך את אבי העורקים בקלות באופן היסטולוגי. בנוסף, השתלת PVG למודל CI שימושית במיוחד למחקרי וסקולופתיה של השתלות. זאת מכיוון שדחייה וסקולרית חריפה אינה מהווה גורם הפרעה מרכזי, והתפתחות הווסקולופתיה דומה לממצאים הקליניים.

אם כן, נתחיל. התורם המשמש להשתלה אורטוטופית של אבי העורקים הוא חולדה מסוג PVG השוקלת כ-250 עד 300 גרם. לאחר הרדמת בעל החיים, גלחו את הפרווה בבטן ובבית החזה.

הנח את החולדה על גבה והנח מסכת פנים מעל אפה ופיה. כדי לשמור על ההרדמה, חטא באופן נרחב את אזור הבטן והבית באמצעות Provo iodine, ולאחריו 80% ethanol. לאחר מכן, בדוק את רפלקסי בעל החיים על ידי צביטה של כפות רגליו האחוריות.

כדי לוודא שהחולדה הורדמה באופן מספיק. בצע דימום של החולדה על ידי פתיחת הבטן וחיתוך חור באבדה האבdominalית. פתח בזהירות את בית החזה כדי לאתר את אבדה החזה היורדת.

נתח את האאורטה החזיתית (thoracic aorta) מרקמות סמוכות, כגון עצבים שומניים והוושט. הוצא מקטע של 1.5 סנטימטר מהאאורטה באמצעות מספרי acuta, תוך הימנעות מפגיעה ברקמת האאורטה. בצע פרפוזיה יסודית של השתל האאורטלי במי מלח קרים ושמור את השתל בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס.

המקבל להשתלה אורתוטופית זו של אבי העורקים הוא חולדה מסוג A CI השוקלת כ-250 עד 300 גרם. כדי להתחיל בפרוצדורה זו, גלחו את אזור הבטן של החולדה המורדמת ומרחו משחה לעיניים כדי למנוע את התייבשותן במהלך ההרדמה. הניחו את החולדה על גבה והניחו מסכת פנים מעל אפה ופיה כדי לשמור על ההרדמה.

בשלב הבא, חטאו את אזור הבטן באמצעות יוד פרובי (provo iodine), ולאחריו אתנול 80%. לאחר צביטה של כפות הרגליים האחוריות כדי לוודא שהחולדה מורדמת מספיק, פתחו את הבטן על ידי ביצוע חתך בקו המרכז של הבטן והפרדה של העור והשרירים. שני שלבים.

לאחר פתיחת הבטן, העבירו את המעיים לתוך כפפה ספוגה בתמיסת סלין. קפלו את הכפפה סביב המעיים כדי למנוע איבוד לחות. הסירו את רקמת השומן המכסה את אבי העמקים הבטני (abdominal aorta).

בצעו דיסקציה של האורטה מהאזור התת-כלייתי (infrarenal) ועד לפיצול, תוך הקפדה שלא לגרום נזק לענפי כלי הדם. במידת הצורך, קשרו את ענפי האורטה לאחר ביצוע הדיסקציה. ראשית, השתמשו בתפסנית מיקרו-כירורגית בחלק התת-כלייתי של האורטה כדי לעצור את זרימת הדם.

כעת מקמו תסבך (clamp) שני קרוב לפיצול של האורטה. לאחר שזרימת הדם הופסקה, הסירו מקטע קצר של האורטה. לאחר מכן, קחו את השתל האורטלי התורם שנשמר ב-0.9%saline על קרח.

קצרו אותה לאורך המתאים ומקמו אותה ברווח באורטה. חברו את אורטת התורם לאורטת המקבל על ידי תפרים רציפים של prolene 8/0, החל מהאנסטומוזה הקריאלית מקצה לקצה. עם סיום האנסטומוזה הדיסטלית מקצה לקצה, פתחו בזהירות את התסביך הדיסטלי.

לאחר מכן, פתחו בזהירות את התסבך הגניאלי. ניתן יהיה להבחין בדופק בקצה הדיסטלי של האורטה. כעת החזירו את המעיים אל תוך הבטן ושטפו את הבטן בתמיסת סלין סטרילית שחוממה מראש.

סגרו את שכבת השריר של דופן הבטן באמצעות תפרי סינתטיים מסוג Prolene במידה 6-0 בטכניקת תפר רציף. לאחר מכן, השתמשו בתפרי Prolene במידה 5-0 כדי לסגור את העור בעוד החולדה עדיין תחת הרדמה. מזריקו 4-5 mg/kg של Carprofen תת-עורית.

החזירו את בעל החיים לכלובו. הוסיפו methimazole למי השתייה כמשכך כאבים למשך שלושה ימים. לאחר ההשתלה.

תוצאות ההיסטופתולוגיה לאחר 120 ימים יוצגו באמצעות מיקרוסקופ ההיסטולוגיה שלנו. התמונות יראו בבירור את התפתחות הווסקולופתיה של השתל. היצרות הלומן שהתפתחה תודגש באמצעות אנימציית מחשב.

הראינו כעת כיצד לבצע השתלה אוטוטופית של אבי העורקים בעכברים. כמו כן, הדגמנו באמצעות היסטופתולוגיה את הפיתוח המוצלח של וסקולופתיה לאחר השתלה לאחר 120 ימים. שיטה זו מאפשרת לחקור השפעות ראשוניות של תרופות על וסקולופתיה כרונית של אלוגרפט.