Orthotopic אבי העורקים להשתלות: מודל עכברוש לחקר התפתחות vasculopathy כרונית

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לבסס מודל מדויק ושיטה יישומית ופשוטה לחקירת התפתחות של וסקולופתיה לאחר השתלה. הדבר מושג באמצעות שימוש בשילוב זנים של PVG ו-CI. השלב השני של הפרוצדורה הוא קצירת אאורטה של התורם.

השלב השלישי של הפרוצדורה הוא הכנת המקבל. השלב האחרון של הפרוצדורה הוא ביצוע אנסטומוזה בין האורטה של התורם לאורטה של המקבל. לבסוף, ניתן להפיק תוצאות המראות היווצרות של נאו-אינטימה באמצעות פתולוגיה היסטולוגית.

שלום, אני סוניה שוופל, פרופסור לאימונולוגיה של השתלות במעבדת Thet Eye במרכז הלב האוניברסיטאי בהמבורג, גרמניה. ואני מניש דובוף, גם אני ממעבדת TS Eye.

המעבדה שלי מתמחה באימונולוגיה של השתלה. בסרטון זה נציג בפניכם את מודל השתלת האורטה האורטוטופית, מודל פשוט ותקף לחקר התפתחות וסקולופתיה של השתלה בעכברים. אנו משתמשים בהליך זה במעבדתנו כדי לחקור דחייה כרונית בהשתלות קרדיווסקולריות.

במודל השתלה אורתוטופית של אבי העורקים, ניתן להעריך בקלות את אבי העורקים היסטולוגית. בנוסף, מעבר של PVG למודל CI שימושי במיוחד למחקרי וסקולופתיה של השתלה, מכיוון שדחייה וסקולרית חריפה אינה מהווה גורם מתערבב מרכזי וההתפתחות של הוסקולופתיה דומה לממצאים הקליניים.

נתחיל בתהליך. התורם המשמש בהשתלה אורתוטופית (ORTHOTOPIC) זו של אבי העורקים הוא חולדה מסוג PVG השוקלת כ-250 עד 300 גרם. לאחר הרדמת בעל החיים, גבזו את הפרווה בבטן ובבית החזה.

השכיבו את החולדה על גבה והניחו מסכת פנים על אף ופיה. כדי לשמור על ההרדמה, חטאו את אזור הבטן והביתה באופן נרחב באמצעות Provo iodine, ולאחר מכן באמצעות 80% ethanol. לאחר מכן, בדקו את רפלקסיה של בעל החיים על ידי צביטה בכפות רגליו האחוריות.

כדי לוודא שהחולדה הרדימה מספיק. בצעו דימום של החולדה על ידי פתיחת הבטן וחיתוך חור באורטה הבטנית (abdo aorta). פתחו בזהירות את בית החזה כדי למצוא את האורטה החזית היורדת (descending thoracic aorta).

נתקו את אבי העורקים החזי (thoracic aorta) מהרקמות שסביבו, כגון עצבים, שומן והוושנח. הוציאו מקטע של 1.5 סנטימטר מהאבי העורקים באמצעות מספרי acuta, תוך הקפדה על מניעת נזק לרקמת האבי העורקים. בצעו פרפוזיה יסודית של השתל העורקי עם סליין קר ושמרו את השתל בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס.

החיה המקבלת להשתלה אורטוטופית זו של אבי העורקים היא חולדת A CI השוקלת כ-250 עד 300 גרם. כדי להתחיל בפרוצדורה, גלחו את אזור הבטן של החולדה המורדמת ומרחו משחה לעיניים כדי למנוע את התייבשותן במהלך ההרדמה. הניחו את החולדה על גבה והניחו מסכת פנים על אפה ופיה כדי לשמור על רמת ההרדמה.

בשלב הבא, חטא את אזור הבטן באמצעות povidone-iodine, ולאחריו ethanol 80%. לאחר צביטה של הרגליים האחוריות כדי לוודא שהחולדה נמצאת תחת הרדמה מספקת, פתח את הבטן על ידי ביצוע חתך אבדיומנלי במרכז הבטן והפרדה של העור והשרירים. שני שלבים.

לאחר פתיחת הבטן, העבירו את המעיים לתוך הכפפה עם התמיס saline. קפלו את הכפפה סביב המעיים כדי למנוע איבוד לחות. הסירו את הרקמה השומנית המכסה את אבי העורקים הבטני (abdominal aorta).

בצעו דיסקציה של האורטה מהאזור התת-כלייתי (infrarenal) ועד לפיצול, תוך הקפדה שלא לגרום נזק לענפי כלי הדם. במידת הצורך, קשרו את ענפי האורטה לאחר ביצוע הדיסקציה. ראשית, השתמשו בתפסנית מיקרו-כירורגית בחלק התת-כלייתי של האורטה כדי לעצור את זרימת הדם.

כעת מקמו תפסנית שנייה קרוב לפיצול של ה-aorta. לאחר שהזרם הדם הופסק, הסירו מקטע קצר של ה-aorta. לאחר מכן, קחו את הש Transplant של ה-aorta מהתורם, שנשמר ב-0.9% saline על קרח.

קצרו את הצינור לאורך המתאים ומקמו אותו ברווח באורטה. חברו את האורטה של התורמה לאורטה של המקבל באמצעות תפרים רציפים של prolene 8/0, החל מהאנסטומוזה קצה-לקצה הקראניאלית. עם סיום האנסטומוזה קצה-לקצה הדיסטלית, פתחו בזהירות את התפס הדיסטלי.

כעת, פתח בזהירות את התסמין הגולגולתי. ניתן יהיה להבחין בדופק בקצה הדיסטלי של האורטה. כעת החזר את המעיים אל תוך הבטן ושטוף את הבטן בתמיסת סלין סטרילית שחוממה מראש.

סגרו את שכבת השרירים של דופן הבטן באמצעות תפרים רצים של פרולין (proline) במידה 6/0. לאחר מכן, השתמשו בתפרים רצים של פרולין במידה 5/0 לסגירת העור בעוד החולדה עדיין תחת הרדמה. מזריקו תת-עורית 4-5 mg/kg של carprofen.

החזירו את בעל החיים לכלובו. הוסיפו methimazole למי השתייה כשיכוך כאבים למשך שלושה ימים. לאחר השתלה.

תוצאות ההיסטופתולוגיה לאחר 120 ימים יוצגו תחת מיקרוסקופ ההיסטולוגיה שלנו. התמונות יראו בבירור את התפתחות הווסקולופתיה של השתמה. היצרות הלומן שהתפתחה תודגש באמצעות אנימציית מחשב.

הדגמנו כעת כיצד לבצע השתלה אוטוטופית של אבי העורקים בחולדות. כמו כן, הצגנו באמצעות היסטופתולוגיה פיתוח מוצלח של וסקולופתיה של השתלה לאחר 120 ימים. שיטה זו מאפשרת לחקור השפעות ראשוניות של תרופות על וסקולופתיה כרונית של אלוגרפט.