Name: תרופות משלוח מערכתית מקומי לטיפול במחלות של מערכת העצבים המרכזית מודלים מכרסמים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-08-16T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 51 s
Description: למד ארבע שיטות למסירת תרופות למערכת העצבים המרכזית בעכברים: זריקה תוך-ורידית, תוך-בטנית, הנזקה דרך הפה ושיטת CED להזרקה מקומית למוח. השיטות מאפשרות מחקר פרה-קליני של טיפולים נוירולוגיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NS65819 (CDJ, ל), NS049720 (CDJ), CA097257 (CDJ, ל), CIRM DR1-01426 ברצוננו להודות סנטוס רחל לקבלת סיוע טכני.

<ol><li>Bobo, R. H., Laske, D. W., Akbasak, A., Morrison, P. F., Dedrick, R. L., Oldfield, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-enhanced+delivery+of+macromolecules+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Convection-enhanced delivery of macromolecules in the brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 91, 2076-2080 (1994).</li>
<li>Degen, J. W., Walbridge, S., Vortmeyer, A. O., Oldfield, E. H., Lonser, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+efficacy+of+convection-enhanced+delivery+of+gemcitabine+or+carboplatin+in+a+malignant+glioma+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Safety and efficacy of convection-enhanced delivery of gemcitabine or carboplatin in a malignant glioma model in rats.</a> J Neurosurg. 99, 893-898 (2003).</li>
<li>Dickinson, P. J., LeCouteur, R. A., Higgins, R. J., Bringas, J. R., Roberts, B., Larson, R. F., Yamashita, Y., Krauze, M. T., Noble, C. O., Drummond, D. C., Kirpotin, D. B., Park, J. W., Berger, M. S., Bankiewicz, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canine+model+of+convection-enhanced+delivery+of+liposomes+containing+CPT-11+monitored+with+real-time+magnentic+resonance+imaging%3A+laboratory+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Canine model of convection-enhanced delivery of liposomes containing CPT-11 monitored with real-time magnentic resonance imaging: laboratory investigation.</a> J Neurosurg. 108, 989-998 (2008).</li>
<li>Gill, S. S., Patel, N. K., Hotton, G. R., O'Sullivan, K., McCarter, R., Bunnage, M., Brooks, D. J., Svendsen, C. N., Heywood, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+brain+infusion+of+glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+in+Parkinson+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Direct brain infusion of glial cell line-derived neurotrophic factor in Parkinson disease.</a> Nature Medicine. 9, 589-595 (2003).</li>
<li>Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+novel+therapeutic+agents+in+tumors%3A+physiological+barriers+and+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Delivery of novel therapeutic agents in tumors: physiological barriers and strategies.</a> J Natl Cancer Inst. 81, 570-576 (1989).</li>
<li>Krauze, M. T., Saito, R., Noble, C. O., Tamas, M., Bringas, J., Park, J. W., Berger, M. S., Bankiewicz, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflux-free+cannula+for+convection-enhanced+high-speed+delivery+of+therapeutic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Reflux-free cannula for convection-enhanced high-speed delivery of therapeutic agents.</a> J Neurosurg. 103, 923-929 (2005).</li>
<li>Krauze, M. T., Vandenberg, S. R., Yamashita, Y., Saito, R., Forsayeth, J., Noble, C. O., Park, J. W., Bankiewicz, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+of+real-time+convection-enhanced+delivery+of+liposomes+to+primate+brain%3A+a+long-term+retrospective%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Safety of real-time convection-enhanced delivery of liposomes to primate brain: a long-term retrospective.</a> Exp Neurol. 210, 638-644 (2008).</li>
<li>Murad, G. J., Walbridge, S., Morrison, P. F., Garmestani, K., Degen, J. W., Brechbiel, M. W., Oldfield, E. H., Lonser, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time%2C+image-guided%2C+convection-enhanced+delivery+of+interleukin+13+bound+to+pseudomonas+exotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Real-time, image-guided, convection-enhanced delivery of interleukin 13 bound to pseudomonas exotoxin.</a> Clin Cancer Res. 12, 3145-3151 Forthcoming.</li>
<li>Ozawa, T., James, C. D. Human Brain Tumor Cell and Tumor Tissue Transplantation Models. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOzawa%2C+T+%22CNS+Cancer%3A+Models%2C+Markers%2C+Prognostic+Factors%2C+Targets%2C+and+Therapeutic+Approaches%22">CNS Cancer: Models, Markers, Prognostic Factors, Targets, and Therapeutic Approaches</a>. Van Meir, E. , Humana Press-Springer. New York, NY. 147-162 (2009).</li>
<li>Szerlip, N. J., Walbridge, S., Yang, L., Morrison, P. F., Degen, J. W., Jarrell, S. T., Kouri, J., Kerr, P. B., Kotin, R., Oldfield, E. H., Lonser, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+convection-enhanced+delivery+of+viruses+and+virus-sized+particles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of convection-enhanced delivery of viruses and virus-sized particles.</a> J Neurosurg. 107, 560-567 (2007).</li>
<li>UCSF Animal Care & Use Program - Standard Procedures & Guidelines [Internet]. , University of California, San Francisco. San Francisco, California. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.iacuc.ucsf.edu/Policies/awStandardProcedures.asp">http://www.iacuc.ucsf.edu/Policies/awStandardProcedures.asp</a> Forthcoming.</li>
<li>Yamashita, Y., Krauze, M. T., Kawaguchi, T., Noble, C. O., Drummond, D. C., Park, J. W., Bankiewicz, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-enhanced+delivery+of+a+topoisomerase+I+inhibitor+%28nanoliposomal+topotecan%29+and+a+topoisomerase+II+inhibitor+%28pegylated+liposomal+doxorubicin%29+in+intracranial+brain+tumor+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Convection-enhanced delivery of a topoisomerase I inhibitor (nanoliposomal topotecan) and a topoisomerase II inhibitor (pegylated liposomal doxorubicin) in intracranial brain tumor xenografts.</a> Neuro Oncol. 9, 20-28 (2007).</li>
</ol>

הנהלים כל הפגינו כאן אושרו על ידי טיפול קליפורניה בסן פרנסיסקו מוסדיים בעלי חיים ועדת שימוש.

הערכה Preclinical של היעילות של כל סוכן טיפולית חייבת להביא בחשבון מאפייני תרופתי של הסוכן ואת רקמת היעד של עניין. בעוד שיטות מערכתית של הממשל הם בכלל קליל יותר נסבל טוב יותר על ידי החולים, הסלקטיביות של מחסום דם מוח לעתים קרובות מחייב אספקה ​​מקומית של טיפול לטיפול במחלות מערכת העצבים המרכזית. הנה, יש לנו הפגינו שיטה אחת של משלוח ישירות אל המוח: CED. צורות אחרות של משלוח מקומי למוח כוללים ניהול ישיר נוזל השדרה, הזרקת בולוס intratumoral, הזרקת חדרית. שיטות אלה, diffusibility של טיפולי חשוב מאוד, עם דיפוזיה עניים להגביל את אזור הכיסוי כדי מילימטרים ספורים מאתר ההזרקה (Jain 1989, בובו 1994). לעומת זאת, CED משתמשת בלחץ חיובי כדי להגדיל את שטח של חלוקת תרופות (בובו 1994), תוך מתן טיפול הכוונה למבנים neuroanatomical ספציפיים. במעבדה שלנו, יש לנו CED ביצע בהצלחה לתוך גזע המוח, כמו גם לתוך putamen caudate במכרסמים (איור 4). היכולת לנהל CED במודלים של מכרסמים הפך חשוב יותר ויותר בשיתוף עם עניין גובר למקסם את היעילות הטיפולית בטיפול בסוגים שונים של מחלות מערכת העצבים המרכזית. CED ניתן להשתמש כדי לספק מגוון של סוכנים, כולל חלבונים מטוהרים, תרופות מולקולה קטנה, ווירוסים (גיל 2003, Degen 2003, Szerlip 2007). מגוון של מחלות ניתן לטפל CED כולל סרטן של מערכת העצבים המרכזית (ימשיטה 2007) וכן מחלות ניווניות כגון פרקינסון (גיל 2003). כמו מחקר CED ממשיכה להתרחב, את הצורך בתחום ההדמיה vivo של טיפול מנוהל CED הוא דומה גוברת. בעוד דימות פלואורסצנטי הפגינו כאן עלול לא להיות גלויים דרך הגולגולת האנושית, שיטות אחרות העסקת שיתוף עירוי של סוכנים בניגוד MRI (דיקינסון 2008) מושכים עניין להערכת הישימות לניטור infusates בחולים עם מחלה במערכת העצבים המרכזית.

<table><tbody><tr><td>2% Chlorhexidine</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9756995</td><td>מוכר גם כ-Nolvasan&amp;#8221;</td></tr><tr><td>מחט 20g</td><td>BD Biosciences</td><td>305175</td><td></td></tr><tr><td>מחט 28g (עם מזרק)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-004-270</td><td>מוכר גם כמזרק אינסולין</td></tr><tr><td>3% Hydrogen Peroxide</td><td>Fisher Scientific</td><td>H312P-4</td><td>יש להרחיק מאור</td></tr><tr><td>מקלונים מכותנה</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-100</td><td>יש לעקר באוטוקלאב לפני השימוש</td></tr><tr><td>דבק מבוסס Cyanoacrylate</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9592632</td><td>מוכר גם כ-Krazy Glue&amp;#8221;</td></tr><tr><td>סכילי ניתוח חד-פעמיים</td><td>Feather Safety Razor Co, Ltd.</td><td>2975</td><td>מס' 21</td></tr><tr><td>גזה</td><td>Fisher Scientific</td><td>22028563</td><td>יש לעקר באוטוקלאב לפני השימוש</td></tr><tr><td>פד חימום</td><td>Dunlap</td><td>HP950</td><td></td></tr><tr><td>קטטר I.V.</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-841-20</td><td></td></tr><tr><td>משאבת עירוי</td><td>BASi</td><td>MD-1000, MD-1001</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת Living Image</td><td>Caliper Life Sciences</td><td>יש ליצור קשר לקבלת הצעת מחיר</td><td></td></tr><tr><td>משחה אופתלמית</td><td>Cardinal Health</td><td>1272830</td><td>מוכר גם כ-Akwa Tears&amp;#8221;</td></tr><tr><td>מתאמי מזרק מפלסטיק</td><td>Upchurch Scientific</td><td>P-604, P-200NX, P-215X, P-630</td><td>מתאים למזרקי Luer Lock</td></tr><tr><td>צינורית סיליקה</td><td>Polymicro Technologies</td><td>2000020</td><td></td></tr><tr><td>מהדק עור, סיכות, מסיר סיכות</td><td>Stoelting Co.</td><td>59020</td><td></td></tr><tr><td>מסגרת סטריאוטקסיס</td><td>Stoelting Co.</td><td>51725</td><td></td></tr><tr><td>צינורית טפלון</td><td>Upchurch Scientific</td><td>1520</td><td></td></tr><tr><td>Xenogen Lumina</td><td>Caliper Life Sciences</td><td>יש ליצור קשר לקבלת הצעת מחיר</td><td></td></tr></tbody></table>

תרופות משלוח מערכתית מקומי לטיפול במחלות של מערכת העצבים המרכזית מודלים מכרסמים

Systemic and Local Drug Delivery for Treating Diseases of the Central Nervous System in Rodent Models

בדיקות פרה יסודית של מערכת העצבים המרכזית (CNS) הרפוי כולל שיקול של מסלולים של הממשל biodistribution סוכן בהערכת היעילות הטיפולית. בין שני הסיווגים העיקריים של הממשל המקומי לעומת המערכתיות, גישות משלוח מערכתית הם העדיפו לעתים קרובות בשל קלות הניהול. עם זאת, משלוח מערכתית עלול לגרום ריכוז התרופה הכי מוצלח להיות מושגת בתוך מערכת העצבים המרכזית, להוביל למסקנות שגויות לגבי יעילות סוכן. מקומי משלוח הסמים שיטות פולשניות יותר, אבל עשוי להיות נחוץ כדי להשיג טיפולית CNS רמות התרופה. כאן, אנו להפגין טכניקה נכונה במשך שלושה מסלולים של אספקת סמים מערכתית: הזרקה תוך ורידי, הזרקה intraperitoneal, ו gavage הפה. בנוסף, אנו מציגים שיטה למסירה המקומית למוח: הסעה משופרת המסירה (CED). השימוש של תרכובות fluorescently שכותרתו נכלל בתחום ההדמיה עבור vivo ואימות של והתרופות הנכון. שיטות מוצגים באמצעות מודלים Murine, אבל יכול בקלות להיות מותאם לשימוש אצל חולדות.

בדיקות פרה יסודית של תרופות הפועלות על מערכת העצבים המרכזית כרוך לעתים קרובות בהערכת השוואת biodistribution התרופה בשיתוף עם מסלולים ספציפיים של הממשל. הנה שלוש שיטות נפוצות של משלוח מערכתית (תוך ורידי, intraperitoneal, ובעל פה), כמו גם שיטה למסירה מקומית (הסעה משופרת משלוח) הם הוכיחו בעכברים.

בדיקה פריקלינית יסודית של תרופות למערכת העצבים המרכזית (CNS) כוללת בחינה של נתיבי המתן וההפצה הביולוגית של החומר...

במאמר וידאו זה מוצגות ארבע שיטות להחדרת תרופות למערכת העצבים המרכזית. שלוש השיטות הראשונות הן הזרקה לווריד, הזרקה תו-פעטונית והזנה דרך פה (gavage). כל שלוש השיטות הללו מובילות להחדרה סיסטמית של התרופה.השיטה האחרונה היא עירוי מקומי של תרופה לתוך מוחו של העכבר. עבור שיטה זו, נעשה שימוש בדימות אופטי in vivo כדי לוודא שהעירוי בוצע כראוי. שלוש טכניקות ההגשה המערכתיות הן פרוצדורות סטנדרטיות הנמצאות בשימוש נרחב במסגרות פרה-קליניות.טכניקת המתן המקומית מאתגרת מעט יותר, אך היא מאפשרת מתן ישיר של החומר למוח תוך עקיפת מחסום הדם-מוח. שיטות אלו יכולות לסייע במתן מענה לשאלות מפתח באונקולוגיה מודרנית, כגון יעילותם והפצתו של תרופות חדשניות, ובכך לספק תובנות לגבי טיפולים חדשניים בגידולי מוח.ניתן ליישם שיטות אלו גם למחלות אחרות של מערכת העצבים המרכזית, כגון הפרעות נוירודגנרטיביות ופסיכיאטריות. השתמש במנורת חימום כדי להרחיב את וריד הזנב על ידי חימום העכבר למשך 5 עד 10 דקות, תוך ניטור קפדני של העכבר בכל עת כדי למנוע היפותרמיה במהלך החימום. טען את התרופה למזרק אינסולין בכילייב 28.אין להזריק בבת אחת נפח העולה על 1% ממשקל גופו של העכבר. לאחר חלוף חמש עד 10 דקות, העבירו את העכבר למכשיר קיבוע; בזנב העכבר ניתן לראות ארבעה כלי דם.הכלי הדורסלי והלטרליים הם ורידים. הכלי הוונטרלי הוא עורק. כדי לגשת לוריד הזנב הלטרלי, החזק את זנבו של העכבר בנקודה הדיסטלית ביותר וסובב אותו ב-90 מעלות כך שהוריד יפנה כלפי מעלה. נקה את אתרי ההזרקה באמצעות מטלית אלכוהול.בשלב הבא, הכניסו את המזרק המוכן לווריד כאשר פיית המחט פונה כלפי מעלה. אם המחט ממוקמת כראוי בווריד, היא אמורה לנוע בחופשיות וללא התנגדות. הזריקו את התרופה באיטיות בלחץ אחיד במשך 5 עד 10 שניות.אם הזנב נפח, הפסיקו את ההזרקה, שכן הדבר מעיד על כך שהמחט אינה נמצאת עוד בתוך הווריד. לאחר ההזרקה, הפילו לחץ עדין על נקודת ההזרקה עד להפסקת הדימום. פעולה זו אורכת בדרך כלל 30 עד 60 שניות.יש לעקוב אחר העכבר במשך חמש עד 10 דקות כדי לוודא שאין דימום נוסף. יש להיערך להליך זה על ידי טעינת מזרק עם מחט בדרגת gauge 28 בתרופה. הוצא את העכבר מכלובו בעזרת הזנב והנח אותו על משטח בעל טקסטורה, כגון מכסה של כלוב, כך שלעכבר יהיה משהו לאחוז בו.יש לאפשר לעכבר למתוח את גופו. לאחר מכן, אחזו בעור בגבו של העכבר, תוך הקפדה לצבוט בעדינות כמה שיותר עור בין האגודל, האצבע והאמה. הפכו את העכבר כך שבטנו תפנה כלפי מעלה.אם העכבר יכול להזיז את ראשו בחופשיות, שחררו את האחיזה ונסו שוב. כדי למנוע נשיכות במהלך ההזרקה, החזיקו את העכבר במצב הפוך מעט כדי לסייע בהרחקת האיברים מאתר ההזרקה. הכניסו את מחט המזרק המוכנה בזווית של 30 מעלות לרביע השמאלי התחתון של העכבר, כדי להבטיח שהמחט נמצאת בחלל האינטraperitoneal.משוך את בוכנת המזרק לאחור. אם לא נשאב נוזל אל תוך המזרק, הזרק את תכולת המזרק בלחץ אחיד במשך אחת עד חמש שניות. שחרר את העכבר.יש לעקוב אחר העכבר במשך חמש עד 10 דקות לאחר ההזרקה כדי לוודא כי הוא חוזר לרמות פעילות נורמליות. יש להתחיל את ההזנה הפומית (oral gavage) על ידי קביעת העומק שבו ניתן להחדיר את המחט לתוך פיו של העכבר. החזיקו מחט הזנה מעוקלת עם קצה כדורי במידה 18 G בגובה הצלע האחרונה.סמנו את האורך באמצעות טוש קבוע. שקלו את העכבר כדי לקבוע את נפח ההזרקה. הנפח המקסימלי שניתן להעביר באמצעות הזנה פומית (oral gavage) הוא 10 milliliters לקילוגרם של משקל גוף.לאחר מכן, טענו את המחט. בשלב הבא, רסנו את העכבר באמצעות אותה אחיזה שהודגמה עבור ההזרקה התוך-בטנית. הכניסו את מחט ה-gavage לפה מעל הלשון והעבירו את המחט דרך הלוע כדי למנוע דקירה של הוושט.אין להחדיר את המחט מעבר לסימון העצירה. על המחט להתקדם בצורה חלקה וללא הפעלת לחץ. כאשר המחט במקומה, לחץ באיטיות על הבוכנה.הוצא את המחט באותה זווית שבה היא הוכנסה. אין לנסות להזריק נפחים גדולים מאלו המומלצים, שכן הדבר עלול להוביל לרפלקס (reflux) ולמסירת תרופה חלקית.החזירו את העכבר לכלובו ועקבו אחריו במשך 5 עד 10 דקות. שימו לב היטב לכל סימן לנשימה מאומצת, העלולה להעיד על חדירת נוזלים לריאות. חזרו על הליך זה במידת הצורך.ניתן לתת עד שלושה מנתקים בפרק זמן של 24 שעות, מכיוון שקנולה ל-CED עבור מכרסמים העמידה לרפלקס עדיין אינה זמינה מסחרית. הרכיבו קנולה המורכבת משלושה חלקים. קטע של צינור סיליקה בקוטר 100 micron שדרכו זורם ה-infuse eight.מחט מתכת קשיחה לתמיכה מבנית וצינור טפלון גמיש להעמסת החומר להחדרה. שמונה. כדי להכין את אזור הניתוח, רסס את כל המשטחים בחומר חיטוי כלורהקסידין 2%. לאחר מכן כסה את המשטחים בסדיני ספיגה.יש להניח את האספקה הבאה באזור הניתוח. בחרו מספר צלחות פטרי, אחת המכילה 3% hydrogen peroxide ואחת המכילה 2% Chlorhexidine, גזי סטריליים ומקלוני צמר גפן. סכיני מנתחים חד-פעמיים סטריליים מספר 21, אוטוקלאב, שדכן לעור עכברים, סיכות ומסיר סיכות.מחטים סטריליות במידה 20, פד חימום לשמירה על טמפרטורת גוף העכבר, מסגרת סטריאוטקטית לעכברים ומשאבת מזריקים בעלת קצב זרימה מבוקר. להכנת הקנולה, חברו מזרק של 1 ml לצינור הטפלון. באמצעות סט של מתאמי מזרק מפלסטיק, הצמידו את הקנולה למסגרת הסטריאוטקטית כך שתהיה ניצבת למשטח הניתוח.באמצעות מזרק של 1 mL, חטאו את הקנולה על ידי העברת 70% ethanol דרכה. חזרו על תהליך זה תוך שימוש בתמיסת סלין סטרילית. לאחר מכן, בדקו אם קיימות דליפות סביב חיבורי הקנולה.משכו את בוכנת המזרק כך שבועת אוויר קטנה תישאב לתוך הקנולה. בועת אוויר זו תפריד בין ה-infuse eight לבין התמיסה המלחית. לאחר מכן, טענו שוב את ה-infuse eight.בצעו רטיבה (Priming) למשאבה על ידי הפעלת הקנולה לזמן קצר. נקו את עורו של עכבר שהורדם באמצעות גוז שסטרילי טבול ב-2% Chlorhexidine, ומרחו משחה אופתלמית כדי לשמור על לחות עיניים מספקת במהלך ההליך. בעזרת סקאלפל סטרילי, בצעו חתך סגיטלי לאורך מרכז הגולגולת, באורך של כ-1.5 סנטימטרים.יש לנקות את פני הגולגולת באמצעות מקלון צמר ספוג בתמיסת hydrogen peroxide בריכוז 3%. בשלב זה, קווי התפרים של הגולגולת צריכים להיות גלויים. אם אינם גלויים, יש להעביר בעדינות מקלון צמר נקי ספוג בתמיסת hydrogen peroxide בריכוז 3% על הגולגולת.זהו את ה-bgma, ולאחר מכן מדדו שני מילימטרים ימינה ומילימטר אחד אחורית כדי לאתר את נקודת ההזרקה. באמצעות מחט סטרילית בכיול 20 gauge, צרו בעדינות חור בגולגולת בנקודה זו על ידי סיבוב המחט כנגד הגולגולת. הימנעו מדחיפת המחט בכוח כלפי מטה אל תוך הגולגולת.בשלב זה, העבירו את העכבר למסגרת הסטריאוטקסית והתחילו במתן חומר הרדמה בשאיפה, ברמה נמוכה. עקבו בקפידה אחר שינויים בקצב הנשימה של העכבר והתאימו את מינון חומר ההרדמה בהתאם.השלב הבא הוא כנראה ההיבט הקשה ביותר של השיטה כולה. בעת מיקום הקנולה, ודאו שהיא ממורכזת מעל החור. כדי לעשות זאת, בדקו את מיקום הקנולה מכל הזוויות.בשלב הבא, מקמו את הקנולה מעל החור בגולגולת ולאחר מכן הורידו אותה שלושה מילימטרים מתחת לפני השטח של הגולגולת. התחילו את ההזרקה על ידי הפעלת משאבת המזרק בהתאם לקצבים ולמשכי הזמן המוצגים כאן בסיום ההזרקה. הוציאו את הקנולה באיטיות ושטפו את הגולגולת ב-3% hydrogen peroxide.יש למרוח שעוות עצם סטרילית לחור באמצעות פינצטה. קרבו את קצוות העור וסגרו אותם בעזרת סיכות. ניתן בופרנורפין תת-עורי להקלה על כאב לאחר הניתוח.הנח את העכבר בכלוב על פד חימום כדי למנוע היפותרמיה. אין לשכן את העכבר בתהליך ההחלמה עם עכברים פעילים אחרים. עקוב אחר העכבר לאחר הניתוח עד להשבתו להכרה וליכולת תנועה.בשל אורך הפרוצדורה, עשויים לחלוף עד שעה עד שהעכבר יחזור לפעילות מלאה. אם תבוצע הדמיה, מומלץ להמתין שעתיים עד שלוש שעות לפני ביצוע הדמיה של infuse.Eight המסומן פלואורסצנטית. לאחר מתן בשיטת CED, מקמו את העכבר המורדם כאשר הגב פונה כלפי מעלה בתחנת הדמיה, תוך שימוש בהגדרת מסנן מתאימה עבור הפלואורסצנציה המודמית.רכשו תמונה עבור CED. עירוי מוצלח אמור להראות את מרבית החומר בגולגולת, סמוך לאתר העירוי. היעדר תגובה שלילית למתן הטיפול הוא אינדיקטור חשוב להזרקה מוצלחת.הסימנים הבאים מעידים על הזרקות לא תקינות: עבור הזרקות לזנב, שינוי במראה, בגודל או בצבע של הזנב, או הופעת בועה או שלפוחית בזנב, המעידות על הגהה תת-עורית במקום תוך-ורידית. עבור הזרקות תוך-peritoneum, נפיחות בעור או שינוי בצבע הבטן עשויים להעיד על הזרקה תת-עורית או על נזק למבנים פנימיים.במתן נוזלים דרך הפה (oral gavage), נשימה מאומצת או שיעול בעכבר עשויים להעיד על כך שנוזלים הוזרקו לריאות במקום לקיבה. ב-CED, תפקוד נוירולוגי הוא חשוב להערכת ההצלחה של מתן הטיפול. עכבר המגלה פרכוסים או חולשה חלקית של צד אחד בגוף (hemiparesis) עשוי להיות שקיבל עירוי שאינו תקין.כאן בוצע דימות in vivo בעכבר, כאשר בצד שמאל מוצגת הזרקה מוצלחת בשיטת CED, ובצד ימין הזרקה לא מוצלחת. שימו לב שבמקרה של ההזרקה המוצלחת, אות הדימות ממוקם במוח. לעומת זאת, בהזרקה שאינה מוצלחת, האות התפשט במורד הציר העצבי.כפי שראיתם, ההיבט המאתגר ביותר של פרוצדורה זו הוא הבחירה הנכונה של נתיב המתן. בעת הולכת תרופות למערכת העצבים המרכזית, חשוב להתחשב בתכונות הפארמקולוגיות של התרופות על מנת לבחור את נתיב המתן המיטבי. וזהו זה.אני מקווה שמצאתם מצגת זו מועילה, ובהצלחה בניסוייכם.

systemic-local-drug-delivery-for-treating-diseases-central-nervous

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

התחל עם מוח חולדה שנקטף שקוע בנוזל מוחי מלאכותי בצלחת פטרי.הפקידו את המילירובוט המגנטי על קליפת המוח.המילירובוט, המכונה MANiAC, מורכב מננו-מוטות ניקל מיושרים מגנטית המוטבעים בתוך מיקרו-קפסולה המורכבת מהידרוג'ל אלגינט תואם ביולוגית ועמוסה בצבע כתרופת מודל.מקם מחולל שדה מגנטי חיצוני מתחת לצלחת הפטרי כדי ליצור שדה מגנטי מסתובב אחיד.הננו-מוטות של הניקל מתיישרים ומסתובבים עם השדה המגנטי, ומניעים את ה-MANiAC על פני השטח בקליפת המוח.אפשר ל-MANiAC לחצות את פני השטח של קליפת המוח, ולעצור באתרי מטרה...

מילי-רובוטים מגנטיים להעברת תרופות ספציפיות לאזור במערכת העצבים המרכזית של החולדה

מקור: Poland, R. et al. מיקרו-הזרקת מוח מכרסם לחקר מצעים מולקולריים של התנהגות מונעת. J. Vis. Exp. (2015)בסרטון זה, מערך מיקרו-הזרקה מלא במים המורכב ממזרק וצינורות מיקרו-מזרק משמש לאספקת תרופות מדויקת. חולדה עם צינורית הנחיה מושתלת מראש עוברת מיקרו-הזרקה ממוקדת למוח, המאפשרת מתן מדויק של חומרים טיפוליים בבעלי חיים ערים עם נזק מינימלי לרקמות.

הזרקה מבוססת מיקרו-הזרקה של חומר טיפולי למוח מכרסם ער

מקור: Li, D., et al. הזרקה תוך-תקלית ישירה של נגיפים רקומביננטיים הקשורים לאדנו בעכברים בוגרים. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים את הליך ההזרקה התוך-תקלית של נגיפים הקשורים לאדנו (AAV) לנוזל המוח (CSF) של עכבר ער, המכסה הכנת מזרק, יישור עמוד השדרה והחדרת מחט מדויקת. שיטה זו מאמתת העברת גנים ממוקדת, ותומכת בפוטנציאל שלה לטיפולים במערכת העצבים המרכזית.

העברה תוך-תקלית של וירוסים במודל עכבר לטיפול במחלות מערכת העצבים המרכזית

אנו מתארים שיטה למקד תרופות למערכת העצבים המרכזית או על ידי השתלת קטטר או ביצוע הזרקת בולוס לתוך החדר לרוחב הנכון בעכברים. אנו מתמקדים באופן ספציפי על המשלוח של אנטיסנס. טכניקה זו היא להתאמה בקלות לתרופות אחרות ולחולדות.

משלוח תוך חדרי ישיר של תרופות למערכת העצבים המרכזית מכרסם

הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקת עירוי מיקרו-כירורגית של עכבר, המעבירה ביעילות חומרים ישירות למוח דרך עורק הצוואר הפנימי.

טכניקה אינפוזיה Microsurgery עכבר למשלוח ואלכוהול ממוקד לתוך מערכת העצבים המרכזית דרך עורק התרדמה הפנימי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול באמצעות התקן מיקום העכבר המאפשר את המיקום המתאים של עכברים עבור המינהל intranasal של המוח מיקוד פפטיד-siRNA המאפשר גנים יעילים השתקה במערכת העצבים המרכזית.

מתקן מיקום להצבת עכברים במהלך המסירה Intranasal siRNA למערכת העצבים המרכזית

כאן, אנו מתארים שיטה להעברת תרופות למערכת העצבים המרכזית העכברוש על ידי שתילת קטטר לתוך החלל המותני הפנימי של עמוד השדרה. אנו מתמקדים במסירת מחלת האנטי-הגיונית, למרות ששיטה זו מתאימה גם לאספקה של שיטות טיפוליות אחרות.

משלוח פנימי של אנטי-סנס וליגונו, במערכת העצבים המרכזית של חולדה

שיטה לאספקת תאי גזע עצביים, הניתנים להזרקת פתרונות או השעיות, דרך עורק הראש המשותף (עכבר) או העורק הראשי החיצוני (עכברוש) לאחר דיווח על שבץ. תאים מוזרק מופצים בהרחבה ברחבי המוח באתר וניתן לאתרם עד 30 d לאחר המסירה.

משלוח פנים-עורקי של תאי גזע עצביים למוח עכברוש ועכבר: יישום איסכמיה מוחין

זריקה תוך-מותנית מייצגת דרך מתן רלוונטית לתרגום למתן טיפול גנטי למערכת העצבים המרכזית. פרוטוקול סטנדרטי מקיף זה לזריקות תוך-מותניות בעכברים וחולדות בילודים, צעירים ובוגרים נועד להנחות חוקרים באימוץ טכניקה זו למחקרי ריפוי גנטי פרה-קליניים.

הזרקה תוך-מותנית של וקטורים של ריפוי גנטי למיקוד מערכת העצבים המרכזית בעכברים וחולדות

מאמר זה מתאר רצף של אירועים אופטימיזציה עבור דימות multimodal של שתלי הסלולר מכרסם במוח באמצעות: (i) ביולומינציה vivo ו הדמיה באמצעות תהודה מגנטית, ו (ב) הודעה מורטם ניתוח היסטולוגית. השילוב בין שיטות הדמיה על חיה אחת מאפשר הערכה שתל נייד עם רגישות גבוהה רזולוציה, וספציפיות.

Multimodal הדמיה של השתלת תא גזע במערכת העצבים המרכזית של עכברים

למד ארבע שיטות למסירת תרופות למערכת העצבים המרכזית בעכברים: זריקה תוך-ורידית, תוך-בטנית, הנזקה דרך הפה ושיטת CED להזרקה מקומית למוח. השיטות מאפשרות מחקר פרה-קליני של טיפולים נוירולוגיים.

תרופות משלוח מערכתית מקומי לטיפול במחלות של מערכת העצבים המרכזית מודלים מכרסמים

גלה סרטונים נוספים