אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:43 דק׳ • April 30th, 2023
-התחילו בהנחת תולעים מפרות את עצמן בשלב הזחל האחרון שלהן על צלחות שנזרעו עם מקור מזון חיידקי. אפשרו לזחלים להתפתח לבוגרים עד שיהיה שפע של ביצים בתוך תולעים ויוטלו על הצלחות. לשטוף את הצלחות עם חיץ כדי לאסוף את הביצים והתולעים.
לאחר מכן, החליפו את החיץ בתמיסת אקונומיקה הממיסה תולעים בוגרות. מוגנים על ידי קליפת הביצית, עוברים ישרדו טיפול זה, אם כי הם יהיו בשלבים שונים של התפתחות. לאחר מכן החליפו את האקונומיקה בחיץ ואפשרו לעוברים להתפתח. כאשר הזחלים בוקעים מקליפות הביצים שלהם בהיעדר מזון, ההתפתחות תיעצר בשלב הזחל הראשון.
מעבירים את הזחלים לצלחות עם מזון כדי לחדש את ההתפתחות. זה יעודד התקדמות סינכרונית דרך שלבי הזחל הנותרים.
כאשר התולעים מגיעות לשלב הזחל האחרון, העבירו אותן לצלחות עם מזון ו-FUdR, מעכב סינתזת DNA המונע ייצור צאצאים. המשך הפיתוח בנוכחות FUdR מייצר אוכלוסייה של תולעים בוגרות סטריליות. בניסוי זה נסנכרן אוכלוסייה של הנמטודה C. elegans.
- כדי להתחיל, להעביר זחלי L4 בעלי רקע גנטי רצוי על מדשאה טרייה של Escherichia coli על מצע גידול נמטודות או לוחות NGM. השתמש לפחות בשני לוחות 100 מ"מ או שלושה לוחות 60 מ"מ לכל זן.
לדגור על התולעים בטמפרטורת הגידול המתאימה במשך שלושה עד ארבעה ימים או עד צלחות מרוכזות עם מספר רב של ביצים ותולעים gravid. שטפו את הביצים והתולעים מהצלחות באמצעות כש
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים