אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:01 דק׳ • April 30th, 2023
הגדל את קו התאים הרצוי כחד-שכבה דו-ממדית דבקה. הסירו את אמצעי התרבית ושטפו במי מלח חוצצי פוספט או PBS. לאחר מכן, מוסיפים טריפסין ודגרים בזמן שהתאים מתנתקים משטח הבקבוק והופכים לעגולים. הוסף מדיה טרייה כדי לנטרל את הטריפסין ולהשהות את התאים. מעבירים את התערובת לצינור חרוט, ומשתמשים בצנטריפוגה כדי להניע את התאים.
החלף את הסופרנאטנט במדיה טרייה והשהה מחדש את כדורית התא. השתמש בהמוציטומטר כדי לספור מספרי תאים ולחשב ריכוז עבודה. לאחר מכן, מעבירים את הכמות הנכונה של תערובת התאים לצלחת הדבקה עגולה ונמוכה במיוחד ודוגרים. התאים מתיישבים לתחתית ומצטברים. בסופו של דבר הם יתחברו זה לזה וייצרו מכלול תאים תלת-ממדי קומפקטי, הספרואידים.
בפרוטוקול לדוגמה, נראה כיצד ליצור ספרואידים תלת-ממדיים מקו תאים של סרטן המעי הגס, וכיצד הדמיה חיה מיושמת כדי לעקוב אחר היווצרותם. התחל על ידי שטיפת קו תאי סרטן המעי הגס עניין עם חמישה מיליליטר של PBS, והסרת התאים מתחתית הבקבוק עם 0.5 מיליליטר של טריפסין במשך חמש דקות ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר אישור ניתוק תחת מיקרוסקופ, לנטרל את אנזים דיסוציאציה התא עם 10 מיליליטר של תווך שלם, ולאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה. השהה מחדש את הגלולה בחמישה מיליליטר של תווך שלם טרי לספירה, והשהה מחדש את התאים בריכוז של 1.5 כפול 10 לתאים השלישיים למיליליטר.
לאחר מכן זרעו 20 מיקרוליטר של תאים
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים