אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 5:15 דק׳ • April 30th, 2023
- בתור התחלה, הניחו צד גחוני של דג מורדם לתוך חריץ בספוג רטוב. הכנס את האלקטרודה החיובית לקו האמצע של הדג ברמת העורקים הבולבוסיים. לאחר מכן, הכנס את האלקטרודה השלילית מתחת לחדר ו 0.5 עד 1 מילימטר משמאל לקו האמצע כדי ליצור מוליך דו קוטבי שבו ניתן למדוד הבדלים בפוטנציאל החשמלי. לבסוף, הכנס את אלקטרודת הייחוס ליד אזור פי הטבעת כדי לקרקע את האות החשמלי.
התחל להקליט, ולאחר זמן קצר, סקור את המעקב כדי לוודא שארבעה קריטריונים מתקיימים. כל צורות הגל חייבות להיות גלויות ונבדלות זו מזו. גל P, המייצג דפולריזציה פרוזדורית, חייב להיות חיובי. הסכום נטו של גלי Q, R ו- S, המייצג דפולריזציה חדרית, חייב להיות חיובי. ולבסוף, גל T, המייצג רפולריזציה פרוזדורית, חייב להיות חיובי. אם הקריטריונים אינם מתקיימים, התאם את האלקטרודות עד לרישום עקבות נאותים.
לאחר ההקלטה, העירו את הדג על ידי טבילתו במים מחומצנים והתזת מים על הזימים עד שהזימים או הדג יתחילו לנוע באופן קבוע. בדוגמה, נבצע אלקטרוקרדיוגרפיה על פני השטח על דג זברה בוגר.
- ביום הניסוי, העבירו את דגי הזברה מהאקווריום למעבדה. כדי להגדיר את מערכת הקלטת האק"ג in vivo, חבר את חלקי הציוד החיוניים והכנס את שלוש אלקטרודות הנירוסטה המקודדות בצבע של מוליך האק"ג לשלושת פורטלי הגישה תואמי הצבע של המגבר. להשראת הרדמה ברמה 4, יש לטבול דג זברה בוגר בצלחת המכילה תמיסה של חומרי הרדמה בריכוזים הנמוכים ביותר שנקבעו מראש שאושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים.
לאחר שדגי הזברה שמרו על רמה להרדמה למשך שלוש שניות, השתמשו בזוג מלקחיים קהים כדי להעביר מיד את הדג לספוג לח עם משטח גחון חריץ כלפי מעלה לצורך מיקום שלוש אלקטרודות האק"ג. הכנס בעדינות את האלקטרודה החיובית לקו האמצע הגחוני בגובה העורקים הבולבוסיים 1 עד 2 מילימטרים מעל קו דמיוני המחבר בין שני הקצוות התחתונים של האופרקולומים.
מקמו את האלקטרודה השלילית בצורה קאודלית ו-0.5 עד 1 מילימטר שמאלה לרוחב לאלקטרודה החיובית במרחק גדול מהאורך האפיקלי-בסיסי המקסימלי של חדר דג הזברה הבוגר. לאחר מכן, מקם את אלקטרודת הייחוס באופן קאודלי ליד אזור פי הטבעת. להקלטת אק"ג, הפעל את המערכת ופתח את תוכנית רכישת נתוני האק"ג. בחר את ההגדרה הרצויה מהתפריטים הנפתחים עבור טווח, מעבר נמוך ומעבר גבוה.
לחץ על Start כדי להתחיל הקלטת אק"ג רציפה ללא פערים בקצב דגימה של 1 קילוהרץ. כדי למטב את מיקום העופרת לקבלת יחס אות לרעש מרבי, לחץ על עצור כדי לעצור את ההקלטה וסקור את המעקב מיד לאחר ניסיון ההקלטה הראשון עבור כל לב. אם האק"ג צפוי להיות תקין, ודא שכל צורות גלי האק"ג נפרדות ונראות לעין ושגל P, קומפלקס QRS נטו וגל T כולם חיוביים.
- השלב הקריטי ביותר הוא מיקום עופרת כדי למקסם את יחס האות לרעש. החל את כל ארבעת קריטריוני האימות לאחר ניסיון רישום האק"ג הראשון עבור כל דג כדי לקבל משוב נכון.
- אם צפוי אק"ג תקין, מקם מחדש את האלקטרודות לפי הצורך עד שכל ארבעת קריטריוני האימות הללו יתקיימו. אם צפוי גל T רגיל אך גל T קטן מדי, מקם מחדש את האלקטרודות כדי למקסם את משרעת גל T. חדש את רישום האק"ג לאחר מיטוב מיקום העופרת, תוך שמירת מטאטא האק"ג לניתוח הבא.
בסוף הקלטת האק"ג, הסר בזהירות את האלקטרודות מבלי לפגוע בדגים. במחקרי הישרדות, העבירו את הדגים למי דגים טריים ומחומצנים ללא טריקאין. שימו לב שבסרטון זה כדי להקל על הקוראים לצפות בדגים המתאוששים מההרדמה, מופסק החמצון.
כדי להקל על ההתאוששות מההרדמה במחקרי הישרדות, השתמשו בפיפטת פסטר כדי להשפריץ במרץ מים על הזימים עד שהדג יחזור לתנועת זימים סדירה או לשחייה. לאחר מכן עקוב אחר הדג להחלמה מלאה מהרדמה לפני החזרת הדגים לאקווריום. הדג נחשב למחלים לחלוטין מהרדמה כאשר הוא יכול לשחות זקוף במשך 5 שניות לפחות.