ג. אלגנס שחול גונאד: טכניקת דיסקציה מהירה

- בצינור המכיל חיץ M9, לאסוף עד 150 תולעים hermaphrodite בשלב הרצוי של הפיתוח. הסר חיידקים מהתולעים על ידי שטיפה עם חיץ M9 וצנטריפוגה של הדגימה.

צפו בצינור תחת מיקרוסקופ מנתח בעת הסרת הסופרנאטנט כדי למנוע אובדן דגימה. מעבירים את התולעים לצלחת זכוכית עם נפח מינימלי של חיץ M9. מוסיפים levamisole כדי להרדים את התולעים.

אתר את ראש התולעת ואת הלוע, או המעי הקדמי, המכיל שני מבנים בצורת פקעת. השתמש בשתי מחטים כדי לחתוך את התולעת מאחורי הלוע. ודא שאתה משלים את הדיסקציה במהירות כדי למנוע השפעה על הרקמה.

ברגע שהציפורן משתבשת, שתי זרועות הגונד מושחלות או נדחפות החוצה מהגוף בגלל הלחץ הפנימי של התולעת.

בדוגמה זו, ננתח גונדות מתולעים בוגרות לצורך ניתוח immunofluorescence.

- יש לבחור 100 עד 150 תולעים בשלב ההתפתחותי הרצוי ולאסוף אותן בצינור מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מיליליטר המכיל 100 מיקרוליטר של חיץ M9. לאחר מכן, מלאו את צינור המיקרו-צנטריפוגה ב-900 מיקרוליטרים נוספים של חיץ M9 וצנטריפוגו אותו ב-1,000 פעמים גרם למשך דקה אחת בטמפרטורת החדר.

תחת מיקרוסקופ ניתוח, להסיר בעדינות 900 מיקרוליטר של חיץ M9. לאחר מכן, חזור על הכביסה פעמיים נוספות כדי להסיר את רוב החיידקים המחוברים.

לאחר מכן, באמצעות קצה מיקרופיפטה של 200 מיקרוליטר עם משעמם מורחב, מעבירים את התולעים ב-100 מיקרוליטר של חיץ M9 לצלחת שעון זכוכית שטוחה. לאחר מכן, מוסיפים 1 עד 3 מיקרוליטר של 0.1 levamisole טוחנת לצלחת ולערבל אותו בעדינות. כעת, חברו שתי מחטים של 25 מד לשני מזרקים כדי ליצור כלי ניתוח אחד לכל יד.

תחת מיקרוסקופ מנתח, מקמו כל מחט מתחת ומעל כל תולעת ובצעו חתך עדין על כל תולעת ליד פקעת הלוע השנייה באמצעות מספריים דמויי תנועה. חתכו את כל בעלי החיים לפחות פעם אחת בתוך חמש דקות כדי שהלבמיסולה תישאר יעילה.

- חשוב מאוד שהנתיחה של בעלי החיים בצלחת תושלם תוך פחות מחמש דקות.

- במקרה שגונאד מושחל אינו נראה לעין, פשוט דלגו מעל אותו בעל חיים. גונדות מושחלות מתאימות נראות כאן.