JoVE Encyclopedia of Experiments
ביולוגיה
0 צפיות • 2:09 דק' • April 30th, 2023
- ראשית, הניחו שקופית מיקרוסקופ בין שתי שקופיות אחרות עם נייר דבק. אלה מספקים תמיכה וספייסרים להכנת כרית האגרוז. לאחר מכן, הניחו טיפה של אגרוז מומס על המגלשה. מיד לחץ עליו למטה עם שקופית נוספת.
לאחר שהאגרוז מתמצק, מפרידים בזהירות את המגלשות כך שהאגרוז נשאר במגלשה אחת. השתמשו תמיד בפדים טריים, שכן רפידות מיובשות עלולות לייבש את בעלי החיים. ודאו שאין סדקים או בועות, שעלולים לשבש את שלמות הפד.
לאחר מכן, להוסיף טיפת הרדמה למרכז כרית ולהעביר 10 עד 15 בעלי חיים אליו, להביא איתם כמה שפחות חיידקים. עודף חיידקים עלול להפריע להדמיה. אם תמיסת ההרדמה מתייבשת, הוסיפו טיפה שנייה על בעלי החיים.
הניחו בעדינות כיסוי על הפד. הימנעו מיצירת בועות או הפעלת לחץ רב מדי עליו כדי למנוע פגיעה בבעלי החיים. לבסוף, תייג את השקופית, המוכנה להדמיה.
- התחל בהכנת שקופיות להדמיה. מניחים טיפת אגרוז מומס על מגלשת מיקרוסקופ ומיד לוחצים על הטיפה עם מגלשת מיקרוסקופ נוספת משטחים בעדינות את האגרוז צריך שהאגרוז יתייבש במשך דקה.
לאחר מכן, הפרידו בזהירות בין שתי המגלשות והשאירו את המשטח המוצק על אחת המגלשות. הניחו את המגלשה על במת המיקרוסקופ והוסיפו טיפת חומר הרדמה של 5 עד 10 מיקרוליטר למרכז כרית האגרס.
השתמשו בפיק מעוקר בחום כדי להעביר במהירות 10 עד 15 בעלי חיים מצלחת המלאי לטיפת ההרדמה לפני שהתמיסה מתייבשת. לאחר מכן, יש למרוח את הכיסוי על ידי הצבתו ממש מעל כרית האגרוז ולהפיל אותו בעדינות כלפי מטה.
מאמר זה מתאר את הכנתן של רפידות אגרוז לדמיון של בעלי חיים קטנים. התהליך כולל יצירה של שכבת אגרוז מוצקה על סרטית מיקרוסקופ, מריחת חומר הרדמה והנחה זהירה של בעלי החיים לצורך תצפית.
בשלבים מוקדמים של תיקוף מטרות וסריקה פנוטיפית, שמירה על שלמות האורגניזם במהלך דימוג חי היא קריטית לקבלת תוצאות פנוטיפיות מדויקות. שיטה זו תומכת בהכנה הדירה של דגימות עבור בדיקות המבוססות על C. elegans, ובכך מפחיתה שונות במדידות של מורפולוגיה תאית ומורפולוגיה של אברונים. על ידי מתן אפשרות לקיבוע סטנדרטי, היא משפרת את מהימנות הנתונים בתהליכי עבודה של גילוי פרה-קליני.
שיטה זו משתלבת ברצף הגילוי המוקדם, ותומכת בתיקוף מטרה באמצעות סריקה פנוטיפית מהימנה במודלים של C. elegans.
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
עודכן לאחרונה: 22 אוגוסט 2026