אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 4:51 דק׳ • April 30th, 2023
- התחילו עם תולעים כדוריות שטופות והוסיפו חיץ ליזיס המכיל SDS, חומר ניקוי ו-DTT, חומר מחזרים. פעולה זו מפרקת את הקוטיקולה המגנה של התולעת וחושפת את הגוף לדיסוציאציה של תאים. הימנע מחשיפה ממושכת למאגר הליזה כדי למזער ליזה של תאים ומוות.
לאחר מכן, להסיר את ריאגנטים lysis עם כמה שטיפות של מאגר בידוד קר. חשוב כי חיץ זה יהיה של האוסמולריות הנכונה כדי למנוע מוות תאי. השתמשו באנזים פרוטאז כדי לפרק חיבורים בין תאים לתאים. עזרו לתהליך ההומוגניזציה יחד עם אנרגיה מכנית על ידי הצמדת התערובת לדופן הצינור.
הוסף מדיה המכילה סרום כדי לעצור את תגובת האנזים ואנטיביוטיקה כדי למנוע זיהום. גלולה ולשטוף את הדגימה מספר פעמים כדי להסיר את רוב הפסולת.
לבסוף, הניחו את הצינור על קרח כדי לאפשר שקיעה של כוח הכבידה. פסולת, כולל שאריות של הקוטיקולה או גושי התא, ישקעו, בעוד תאים מנותקים יישארו תלויים בשכבה העליונה של המדיה. תאים אלה יכולים לשמש לתרבית לטווח קצר או לבידוד אוכלוסיות תאים ספציפיות על ידי FACS או משקעים חיסוניים.
בפרוטוקול לדוגמה, ננתק תולעים טרנסגניות המבטאות GFP בתאי עצב בעלי עניין לבודד ולנתח תאים אלה.
- לאחר איסוף בעלי החיים, צנטריפוגו אותם במהירות של 1,600 כפול גרם למשך חמש דקות. הסר את כל supernatant ו resuspend את התולעים במיליליטר 1 של מדיה M9. מעבירים את המתלה לצינור מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים