אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:50 דק׳ • April 30th, 2023
- כדי לבצע שיתוק הנגרם על ידי שחייה, או בדיקת SWIP, העבירו את זחלי C. elegans מבוימים L4 לצלחת ספוט זכוכית מלאה בנוזל. לזהות L4 hermaphrodites על ידי נוכחות של הפות המתפתח. טלאי בצורת חצי ירח בנקודת האמצע של הגוף, וזנב דמוי שוט.
כדי להעריך שחייה בתיווך דופמין, רשמו את תנועת התולעת המאופיינת בכיפוף גוף בצורת C ובהתנהגות חבטה. בדרך כלל, נוירונים דופמינרגיים משחררים דופמין לתוך השסע הסינפטי, אשר בתורו, קושר קולטני דופמין על התא המקבל.
ברגע שהמסר מועבר, דופמין משתחרר מהקולטנים, ונוירוטרנסמיטורים לא קשורים יכולים להיקלט על ידי תא העצב הדופמינרגי באמצעות חלבוני טרנספורטר מיוחדים ולעשות בהם שימוש חוזר.
בזחלים עם איתות דופמין שונה, הנגרם על ידי השבתת מוטציות בטרנספורטר הדופמין או טיפולים תרופתיים המגבירים את שחרור הדופמין, דופמין מצטבר בשסע הסינפטי. עודף דופמין יתר על המידה מגרה את קולטני הדופמין המפריעים לתוכנית המוטורית ומשאירים את הזחלים משותקים. זחלים שאינם מסוגלים לזוז ישקעו לתחתית הצלחת.
בפרוטוקול לדוגמה, נראה הדגמות מפורטות של בדיקות SWIP ידניות ואוטומטיות ב- C. elegans שטופלו באמפטמין.
- להערכה ידנית של SWIP, הוסף 40 מיקרוליטר של תמיסת בקרה עם או בלי אמפטמין 0.5 מילימולרי לצלחת ספוט זכוכית. תחת סטריאוסקופ, בוחרים 8 עד 10 תולעים בשלב L4 מאוחר עם פיק ריסים, וטובלים את הפיק בבאר המכיל
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים