אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 2:26 דק׳ • April 30th, 2023
- כדי למדוד את תוחלת החיים הממוצעת של אוכלוסיית נמטודות, התחל עם זחלי L1 מסונכרנים התפתחותית בחיץ M9. לקבוע את צפיפות הזחלים, ולאחר מכן להוסיף 50 לכל צלחת. הכינו לפחות שלושה לוחות משוכפלים לכל מצב, כמו גם לוחות גיבוי.
אפשרו לתולעים אלה להתפתח באופן תקין עד שהן מגיעות לשלב L4. עכשיו אתה יכול להוסיף FUdR לצלחות, אשר ימנע את התולעים לייצר צאצאים. לחלופין, יהיה עליך להעביר את התולעים לצלחות חדשות בכל יום לאחר הספירה, כדי להבטיח שאתה מודד רק את תוחלת החיים של דור אחד.
לאחר מכן, להסיר את כל הזכרים. זה יסיר את המשתנים של מין והזדווגות מהניסוי. למחרת, ספרו את מספר התולעים החיות על הצלחת על ידי חיפוש תנועה ספונטנית או תגובה למגע עדין. הסר תולעים מתות ורשום את המספרים. ספרו את התולעים ששרדו מדי יום עד שלא נשארו. בפרוטוקול לדוגמה, נראה הדגמה של בדיקת תוחלת חיים.
- העמיסו על צלחות זרעי החיידקים המוכנות 50 בעלי חיים L1 כל אחת. מקימים את הפלטות באינקובטור של 20 מעלות צלזיוס עד שהעוברים מתפתחים לשלב L4. התפתחות תקינה מ-L1 עד L4 אורכת כ-40 שעות.
לאחר מכן, כדי למנוע ייצור צאצאים, הוסף 160 מיקרוליטר של 50x FUdR לכל צלחת. לאחר מכן הסר את הזכרים, מכיוון שתוחלת החיים נמדדת בדרך כלל רק בהרמפרודיטים. לאחר השלמתם, ארזו מחדש את הצלחות באינקובטור של 20 מעלות צלזיוס.
עד שכל התולעים ימותו, בדקו את יכולת הקיום שלהן על בסיס יומי. כדי לעשות זאת, גע בעדינות בכל נמטודה שאינה זזה על הראש עם חוט פלטינה או ריסים. בעלי חיים לא תגובתיים מתים ויש להוציאם מהצלחת. שימו לב לכל חריגה במהלך שגרה זו.