אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:10 דק׳ • April 30th, 2023
- התחילו עם ביצים כדוריות שבודדו על ידי הלבנת תולעים בוגרות. ודא שכל שלב של הליך זה מתבצע באופן סטרילי כדי למנוע זיהום של תאים בתרבית. השהו את הגלולה בתמיסה של כיטינאז, אנזים המפרק כיטין - פוליסכריד גדול המהווה מרכיב מבני של קליפת הביצה.
לאחר תקופת עיכול מתאימה, צנטריפוגו בעדינות את הביצים והחליפו את הסופרנאטנט במדיום תרבית תאים כדי לעצור את העיכול. לאחר מכן, העבירו את העוברים דרך מחט של 18 מד כדי להפריד באופן מכני תאים בודדים. לאחר מכן, סנן את התמיסה כדי להסיר פסולת מקליפת הביצה או גושי תאים לא מופרדים. לוחים את התאים בצלחת תרבית על פתק כיסוי זכוכית המצופה באגלוטנין בוטנים - לקטין המסייע לתאים להיצמד לחלקת הכיסוי על ידי קשירת פחמימות משטח התא.
בפרוטוקול לדוגמה נכין תאים עובריים להתמיינות ואנליזה מורפולוגית חוץ גופית.
- תוך כדי עבודה מתחת למכסה מנוע זרימה למינרית כדי למנוע זיהום חיידקי, יש להשהות מחדש את הביצים הכדוריות במיליליטר אחד של שני מיליגרם למיליליטר צ'יטינאז ולהעביר אותן לצינור חרוטי טרי של 15 מיליליטר. רוקנו את הצינור במשך 10 עד 30 דקות בטמפרטורת החדר, בהתאם לרעננות האנזים. כאשר כ-80% מקליפות הביצים מתעכלות, צנטריפוגות את הביצים ב-900 גרם למשך שלוש דקות.
לאחר הסרת הסופרנטנט בזהירות, מוסיפים שלושה מיליליטר של מדיום L15. מעבירים את הביצים לצלחת בקוטר שישה סנטימטרים ומתחילים
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים