$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
- כדי להבין את התנאים שבהם נתקלים ולהגיב אליהם בהתאם, לתולעת C. elegans יש, בין היתר, מערכת כימו-חושית מפותחת המסוגלת לזהות מגוון רחב של כימיקלים שונים.
נוירונים חושיים בראש, נוירוני האמפיד והשפתיים הפנימיים, כמו גם נוירונים בזנב, נוירוני הפאסמיד, נחשפים ישירות או בעקיפין דרך הקוטיקולה לתנאים חיצוניים. תאי עצב כימו-סנסוריים אלה מקודדים מידע רלוונטי המשמש את התולעת כדי לייצר תגובה התנהגותית מתאימה: התנהגות המכונה כימוטקסיס.
כדי לבחון את התגובה הכימוטקטית לריחות נדיפים או לרמזים מסיסים במים, בודדו תולעים בשלב ההתפתחותי הרצוי וחשפו אותן לכימיקל הבדיקה בזירת ניסוי שהוכנה מראש. כאשר הוא נחשף לכימיקלים חיוביים כמו אלה המיוצרים על ידי מקור מזון חיידקי, C. elegans מציג כימוטקסיס חיובי כלפי המקור.
באופן הפוך, כאשר היא נחשפת לכימיקלים פחות טובים או רעילים כמו מתכות כבדות, התולעת מציגה כימוטקסיס שלילי, ונמנעת מהכימיקל. לפיכך, מוטנטים חוש הריח או הריח אינם מצליחים להימנע מכימיקלים מרתיעים ונשארים בתנאים שליליים, בניגוד לחיות בר הנמנעות מהמצב המרתיע.
בפרוטוקול לדוגמה, נראה הדגמה של בדיקת כימוטקסיס, הבודקת את סלידתה של התולעת מנחושת.
- לאחר דגירה של לילה, מוציאים את הצלחות מהאינקובטור ובעזרת החלק התחתון המסומן של הצלחת כמנחה, פיפטה 100 מיקרוליטר של תמיסת נחושת טוחנת טרייה 2 סולפט שהוכנה על שפת האגר ליצירת מחסום נחושת חיצוני. פיפטה 25 מיקרוליטר של נחושת שני סולפט פתרון ליצירת מחסום קו האמצע.
ודאו שתמיסת הנחושת בעלת שתי הגופריות אינה באה במגע עם המדבקה החיידקית, ואפשרו לתמיסת הנחושת להתייבש על הצלחת. בדוק אם יש יובש כל חמש דקות לאחר ההעברה עם רקמת מעבדה על ידי טפטוף קל של התמיסה ליד קצה הצלחת כדי להבחין.
מיד לפני הבדיקה, העבירו את האורגניזמים הניסיוניים לצלחת אגר נטולת חיידקים ואפשרו לנמטודות לנוע בחופשיות במשך דקה אחת כדי להסיר חיידקים עודפים.
לאחר מכן, פיפטה 1 מיליליטר של M9 על הצלחת עם צעירים שהועברו 24 שעות קודם לכן כדי לשטוף תולעים לתוך צינור מיקרוצנטריפוגה. צנטריפוגו את הנמטודות במהירות של 3,000 פעמים גרם למשך דקה אחת.
תולעים צריכות ליצור גלולה בתחתית הצינור. שאפו לתמיסת M9 מבלי להפריע לגלולת התולעת. הוסף 1 מיליליטר של תמיסת M9 לגלולת התולעת. הפוך צינור כדי לערבב תולעים עם הפתרון.
אם עודפי חיידקים הועברו בתחילה עם התולעים, חזור על הפעולה בסך הכל חמש פעמים. לאחר השטיפה הסופית, שואפים את supernatant עד 100 מיקרוליטר של פתרון M9 ואת גלולת התולעת נשאר. יש להעביר מיד את התולעים מהתמיסה לאחר השלמת שלבי השטיפה.
פיפטה 20 מיקרוליטר של גלולת התולעת מתחתית הצינור אל החצי נטול החיידקים של צלחת הבדיקה. ודא כי 10 תולעים מועברות לצלחת הבדיקה וכי אין מזון מזהם. אין להעביר חיידקים לצלחות המירוץ למזון נחושת.
הסר תמיסת M9 עודפת מהנמטודות עם רקמת מעבדה תוך דקה. ודא שתמיסת M9 אינה באה במגע עם תמיסת שני סולפטים מנחושת, ושפני השטח של התולעים והאגר נשארים שלמים. השליכו תולעים שהוסרו בטעות עם רקמת המעבדה.
לאחר שתמיסת M9 הוסרה וכל התולעים החלו בדפוסי לוקומוטור לא נוזליים, כלומר כאשר הם הפסיקו לפעום, הפעל את שעון העצר של הבדיקה. אם תולעים נוספות נכללו בטעות, הסירו אותן על ידי קטיף עם שמן הלוקרבון כדי להבטיח שלא יתווספו חיידקים לצלחת.
בדוק את צלחות הבדיקה כל 30 דקות. עבור צלחות הבדיקה עם מדבקות חיידקים, ציון חיובי אורגניזמים אם הם הגיעו למדבקה מזון במשך תקופה של ארבע שעות. עבור לוחות הבקרה השליליים, ציון חיובי אורגניזמים אם הם חצו את המחסום.