אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:22 דק׳ • April 30th, 2023
- ללא גירויים חושיים, תנועת C. elegans היא בדרך כלל קדימה ונקטעת על ידי היפוכים וסיבובים - תמרוני כיוון מחדש אקראיים המביאים לשינוי כיוון. C. elegans הם אלקטרורצפטיביים. כלומר, הם יכולים לחוש שדות חשמליים. כאשר הן נחשפות לזרם ישר מתון או DC, התולעים נעות בנתיב ישר ללא הפרעה לכיוון האלקטרודה השלילית או הקתודה, התנהגות המכונה אלקטרוטקסים.
כדי לצפות בצורה מדויקת יותר בתנועת התולעת, מקם את בעל החיים במכשיר מיקרופלואידי והפעל שדה חשמלי DC. הפוך את כיוון השדה, והתולעת תפנה לכיוון ההפוך - לכיוון הקתודה. החל זרם חילופין AC, והתולעת תפסיק. השינוי לסירוגין בכיוון השדה מכריע את המערכות הנוירומוטוריות של התולעת, וכתוצאה מכך התולעת משתקת. החילו מחדש את שדה DC, והתולעת תחזור לנוע קדימה לכיוון הקתודה.
בפרוטוקול הדוגמה הבא, נראה התקנה המדגימה בדיקת אלקטרוטקסיס במכשיר מיקרופלואידי.
- התחל שלב זה על ידי הצבת המיקרו-ערוץ שהורכב זה עתה על שלב xy הניתן להזזה של מיקרוסקופ עם מצלמה מותקנת המחוברת לצג. חבר את ספק הכוח לאלקטרודות של המיקרו-ערוץ.
לאחר אישור כי ההתנגדות של ערוץ מיקרו הוא סביב 0.6 מגה אוהם, לחבר את צינור הפלט של ערוץ מיקרו מזרק חד פעמי. לאחר מכן לטבול את הפה של צינור הכניסה לתוך פתרון של נמטודות תלוי חיץ פיזיולוגי M9. הפעל לחץ שלילי בתוך המזרק כדי לשאוף נוזל לתוך הערוץ.
כאשר צינורות הכניסה והיציאה מלאים, נתקו את המזרק ובצעו מניפולציה הידרוסטטית של הזרימה על ידי התאמת גובהו היחסי של הצינור כדי למקם תולעת במרכז התעלה. לאחר מכן הניחו את שני הצינורות שטוחים באותו גובה. כדי לשמור על זרימה אפסית בתוך תעלת המיקרו בעת החלפת דגימות תולעים במהלך ניסוי אלקטרוטקסי, לאחר פילוס שני צינורות הכניסה לאותו גובה, אם עדיין יש זרימה בצע התאמות קטנות לגובה הצינור ביחס זה לזה.
- אם אי פעם איננו בטוחים אם הזרימה היא באמת אפס, אנו יכולים לגרום להיפוך בתנועת התולעת על ידי שינוי קוטביות השדה החשמלי ולאחר מכן הערכת המהירות הליניארית של התולעת כשהיא מסתובבת.
- כעת, הגדר את ספק הכוח למתח המתאים. הפעילו את האות החשמלי, ואפשרו דקה אחת של חשיפה מוקדמת לתולעת להתאקלם בשדה, שבמהלכה התולעת אמורה להתחיל לנוע לכיוון הקתודה. בחלוף הדקה, התחילו להקליט.
בסיום הניסוי, הוציאו את כל הנוזלים והתולעים מהערוץ. שטפו את התא במים דה-מיוננים והשאירו את המכשיר על פלטה חמה בטמפרטורה של 125 מעלות צלזיוס לייבוש.