הדמיית סידן: שיטה להמחשת פעילות עצבית ב- C. elegans חי

0 views • 2:23 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- הניחו תולעת טרנסגנית אחת המבטאת GCaMP - חלבון חישת סידן - בתא הדמיה יחד עם מזון חיידקי לתולעת. לאחר מכן אטמו את המנה עם המכסה וסרט המעבדה כדי למנוע אידוי. צפו בו תחת מיקרוסקופ מורכב המצויד לאפיפלואורסנציה של שדה רחב. הקלט תמונות בהילוך מהיר של התולעים כדי לעקוב אחר התנהגותן וללכוד פלואורסצנטיות באמצעות תוכנת הדמיה.

תולעים טרנסגניות מבטאות חלבון חיישן GCaMP תחת שליטה של מקדם המניע ביטוי GCaMP בנוירון מסוים. כאשר תא עצב זה מופעל, הוא יורה פוטנציאל פעולה, אשר depolarizes קרום פלזמה. עם דה-קיטוב, תעלות סידן מגודרות מתח נפתחות בקרום הפלזמה. זה גורם לזרימה של יוני סידן לתוך התא, וכתוצאה מכך עירור עצבי.

GCaMP בתא העצב הנרגש קושר את יוני הסידן. זה גורם GCaMP פלואורסצנטי כאשר התולעים מצולמות עם אור עירור פלואורסצנטי בעוצמה נמוכה. בפרוטוקול לדוגמה, נשתמש בדימות סידן כדי להמחיש פעילות בין-עצבית AVA בתאי C. elegans טרנסגניים במיקרו-תאים של אגרוז.

- הדמיית סידן מבוצעת במיקרוסקופ מורכב המצויד לאפיפלואורסצנטיות שדה רחב. כדי להגביל את החשיפה לאור, השתמש באות לוגי טרנזיסטור-טרנזיסטור המפעיל נורית LED כדי להאיר את הדגימה באותו זמן שהמצלמה מקליטה מסגרת.

הפעל סרט ברצף במשך 24 שעות שמצלם כל תולעת כל 15 עד 30 דקות. ראשית, הקלט 20 שניות עם DIC, לאחר מכן 20 שניות עם פלואורסצנטיות GFP, ולבסוף, תמונה של אות mKate2 עבור רמות ביטוי שליטה.

לבדיקת נתונים חזותיים, השתמש במפת צבע מזויפת כדי לשפר את הנראות של שינויים קטנים בעוצמת הפלואורסצנטיות. לבסוף, בצע ניתוח נתוני סידן באמצעות הליכים סטנדרטיים.

09:10

הכנת Slices האזור Subventricular החריף להדמית סיד

Related Videos

0 Views

09:32

הדמיה ישירה של סידן ER עם ממוקד esterase מושרה טעינת צבע (טד)

Related Videos

0 Views

11:26

סידן רציומטרי הדמיה של נוירונים בודדים ב מתנהג Caenorhabditis Elegans

Related Videos

0 Views

03:01

הדמיית סידן בתאי עצב בודדים המווסתת את התנהגות הטלת הביצים ב- Caenorhabditis elegans

Related Videos

0 Views

03:17

הדמיית דינמיקת סידן תת-תאית בתאי עצב של Caenorhabditis elegans

Related Videos

0 Views

11:06

בהדמיה עצבית סיד vivo ב C. elegans

Related Videos

0 Views

07:51

Microchambers agarose לסידן הדמיה לטווח ארוך של Elegans Caenorhabditis

Related Videos

0 Views

08:03

בשנת הדמיה Vivo סידן בג. אלגיה שרירי הגוף

Related Videos

0 Views

06:50

הדמיית סידן באלגנים של Caenorhabditis המתנהגים בחופשיות עם רטט מבוקר היטב, שאינו מלוטש

Related Videos

0 Views

09:14

הדמיה של קוצים דנדריטיים בקאנורהבדיטיס אלגנס

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026