אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:21 דק׳ • April 30th, 2023
- כדי להתחיל, להעביר תולעים בוגרות צעירות על כרית אגרוז טרי על מגלשה. לאחר מכן להוסיף כמה טיפות של 12 מילימולר levamisole פתרון כדי לשתק את התולעים. מכסים את התולעים בכיסוי ומחכים מספר דקות. הניחו את המגלשה מתחת לדיסק מסתובב, מיקרוסקופ קונפוקלי והתמקדו במשטח החיצוני הצדדי ביותר של התולעת.
האפידרמיס של תולעת בוגרת הוא מבנה חד-שכבתי דק המורכב מסינקיטיה רב-גרעינית הנובעת מאירועי איחוי תאים. פני השטח האפיקליים של האפידרמיס מפרישים קוטיקולה קולגן גמישה, בעוד שמשטח הבסיס מכוסה בשכבה דקה של מטריצה חוץ-תאית הנקראת למינה בסיסית.
לאחר מכן, פצע את פני השטח האפי של האפידרמיס עם לייזר. ציטופלסמה מהתאים הפגומים עלולה לדלוף החוצה, ולהופיע כבועה באתר הפצע.
להקרנת לייזר יש יתרון על פני טכניקות אחרות, כגון פציעה במחט, שכן היא גורמת להפרעה מקומית של תאי הקוטיקולה והאפידרמיס, מבלי לפגוע ברקמות הפנימיות. בפרוטוקול לדוגמה, נראה את תהליך הפציעה בלייזר ב- C. elegans.
- כדי לפצוע במדויק את הנמטודות, פרוטוקול זה משתמש בלייזר פמטו-שניות המחובר למיקרוסקופ קונפוקלי של דיסק מסתובב. סריקות קו או נקודה באמצעות לייזר פמטו-שניות, כגון אלה במיקרוסקופ של שני פוטונים, אמורות גם הן להספיק.
- התחילו באיסוף 10 צעירים על משטח אגר. לשתק אותם בטיפה של שני מיקרוליטר של תמיסת levamisole 12 מילימולרי. לאחר מכן כסו אותם בפתק כי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים