האכלת FITC-Dextran: שיטה לכימות חדירות המעי ב- C. elegans

0 צפיות2:56 דק' • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- C. elegans משמש כמודל ניסיוני של זיהום על ידי פתוגנים במעיים הגורמים למחלות, בין היתר, על ידי שיבוש מחסום המעי והגברת חדירותו. כדי לכמת את שלמות המחסום לאחר חשיפה לחיידק או לתרכובת כימית מעניינת, אספו תולעים על ידי שטיפתן מהצלחת שלהן.

לאחר מכן, הניחו את התולעים האלה על צלחות אגר עם מזון מסומן המורכב מאי-קולי שהומת בחום מעורבב עם FITC-dextran, פוליסכריד במשקל מולקולרי גבוה עם תג פלואורסצנטי.

אפשרו לתולעים לאכול את החיידקים המסומנים. אלה עם מחסומי מעיים שלמים יפנו במהירות את המזון, ואילו בתולעים עם מעיים חדירים יותר, הסמן הפלואורסצנטי יחדור מעבר לומן של האיבר.

מעבירים תולעים לתמיסת פורמלדהיד כדי לתקן את בעלי החיים. לאחר 1 עד 2 דקות, להחליף את פורמלין עם מדיה הרכבה.

לבסוף, דמיינו את התולעים במיקרוסקופ פלואורסצנטי. שימו לב שגרגירי המעי של C. elegans הם אוטופלואורסצנטיים, כך שיהיה אות רקע. אבל בסך הכל, יותר פלואורסצנטיות מעיים מצביעה על חדירות גבוהה יותר.

בפרוטוקול לדוגמה, נבחן את השפעת הטיפול בביומולקולה DIM על חדירות המעי של תולעים נגועות בחיידקי Pseudomonas aeruginosa פתוגניים.

- הכינו את הצלחות בתוספת FITC-dextran על ידי ערבוב 2 מיליליטר של E. coli מומת בחום עם 4 מיליגרם של FITC-dextran. הוסיפו 100 מיקרוליטר מהתערובת לכל אחת מ-20 צלחות אגר NGM טריות והניחו לצלחות להתייבש במשך שעה על ספסל מעבדה נקי. לאחר 48 שעות של טיפול, לשטוף את התולעים עם S Buffer. העבירו אותם לצלחות בתוספת FITC-dextran ולצלחות NGM ללא FITC-dextran ודגרו על הצלחות למשך הלילה.

למחרת, שטפו את התולעים עם S Buffer ואפשרו להן לזחול בצלחת האגר הטרייה של NGM למשך שעה. מוסיפים 50 מיקרוליטר של פורמלדהיד 4% לכל באר של צלחת שחורה בעלת תחתית שטוחה של 96 בארות ומעבירים כ-50 תולעים לכל באר. לאחר 1 עד 2 דקות, להסיר את כל פורמלין ולהוסיף 100 מיקרוליטר של בינוני הרכבה לתוך כל באר.

- פורמלדהיד הוא כימיקל רעיל ויש לטפל בו בזהירות.

12:15

C. elegans המעי כמו המודל עבור המערכת לומן מורפוגנזה ו Vivo ב מקוטב ממברנה להן ברמה תא בודד: תיוג על ידי נוגדנים מכתים, ניתוח אובדן RNAi-של-פונקציה והדמיה

סרטונים קשורים

0 צפיות

08:04

בזמן אמת מדידה של מחסום האפיתל חדירות ב Organoids מעיים אנושיים

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:22

במבחנה , גישות In Vivo כדי לקבוע חדירות תאים אפיתל המעי

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:44

הערכה תפקודית של תנועתיות מעיים ודלקת דופן מעי במכרסמים: ניתוח בדגם סטנדרטי של מניפולצית מעיים

סרטונים קשורים

0 צפיות

02:45

הערכת חדירות המעי ב-C. elegans לאחר חשיפה לחיידקים

סרטונים קשורים

0 צפיות

06:04

Sacs Ex Vivo המעיים להעריך חדירות ריריות מודלים של מחלות במערכת העיכול

סרטונים קשורים

0 צפיות

08:58

ניתוח מועיל אפקטים של תוספי תזונה על פונקציות מעיים אפיתל מכשול במהלך ניסיוני קוליטיס

סרטונים קשורים

0 צפיות

07:23

מדידת ההשפעות של חיידקים וכימיקלים על חדירות המעי של האלמרנים

סרטונים קשורים

0 צפיות

07:32

גישה תוך-ויטאלית המבוססת על מיקרוסקופיה להערכת חמלה במעיים וביצועי שפיכת תאים אפיתל

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:24

הערכה תפקודית של חלחיליות מעיים ונדידה טרנס-אפיתלית נויטרופילית בעכברים באמצעות מודל לולאת מעיים מתוקננת

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 1 אוגוסט 2026