Gonad Microinjection: שיטה של העברת תרכובות ישירות לתוך הנבט של C. elegans
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:59 דק׳ • April 30th, 2023
- כדי להתכונן להזרקה, השתמשו בפיק תולעים כדי להניח עקבות של שמן הלוקרבון על כרית אגרוז. מניחים תולעים בשמן ומשתקים אותן על ידי דחיפתן בעדינות על כרית האגר. ודאו שהשמן מכסה את בעלי החיים במלואם. הוא מאפשר לחמצן להגיע לתולעים תוך מניעת התייבשות. לאחר מכן, הניחו את כרית האגרוז על מיקרוסקופ הזרקה ומקמו את המחט בניצב לתולעת, תוך התמקדות בקצה הדיסטלי של זרוע גונאד.
דחפו בעדינות את המחט דרך הקוטיקולה והזריקו לזרוע הגונד את חומצת הגרעין או תרכובת העניין. כל זרוע גונד מכילה סינקיטיום נבט שיתפתח לביציות בודדות. חומר המוזרק לגונד הדיסטלי ישולב בביציות אלה וישפיע על הדור הבא.
לאחר הזרקת תולעים, להחליף את השמן עם חיץ M9. ברגע שהתולעים מתחילות לנוע, העבירו אותן לצלחת אגר NGM עם מזון חיידקי. בפרוטוקול הבא, שיטת המיקרו-הזרקה של גונאד משמשת להעברת קומפלקס Cas9 כדי למקד ולערוך את הגן dpy-10.
- התחילו בהכנת רפידות C. elegans ו-agarose כמתואר בפרוטוקול הטקסט. מניחים כרית הזרקת אגרוז ומכסים מחליקים על היקף דיסקציה. השתמשו בפיק תולעים כדי להניח רצועה קטנה של שמן הלוקרבון לאורך קצה אחד של הפד. לאחר מכן, השתמשו בקוטף התולעים המצופה בשמן כדי להרים מספר תולעים מצלחת האגר הגז הטבעי אל תוך מסלול השמן. בעזרת שיער דק המחובר לפיפטה, כגון ריסים או שפם חתול, מקמו את התולעים במקביל ודחפו בעדינות את התולעים לתוך כרי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים