קרינת UV: שיטה לשילוב מערכים חוץ-כרומוזומליים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:40 דק׳ • April 30th, 2023
- יצירת מערכי DNA חוץ-כרומוזומליים באמצעות מיקרו-הזרקה - השיטה הפשוטה ביותר ליצירת זני תולעים טרנסגניים - גורמת לאלמנטים גנטיים שאינם מועברים ביציבות במהלך חלוקת התא, ולכן מציגים שיעורי תורשה ורמות ביטוי משתנים. מטרת שילוב המערך בכרומוזום היא להפחית את חוסר היציבות והשונות הגנטית הזו.
כדי לעשות זאת, התחל עם אוכלוסייה מסונכרנת גיל של תולעים טרנסגניות L4, אשר נושאות מערך חוץ-כרומוזומלי שהוכנס בעבר על ידי מיקרו-הזרקה ומאפשר להם לגדול למבוגרים גרבידיים. העבירו את הבוגרים לצלחות חדשות ואפשרו להם להטיל ביצים עד שיהיו לפחות 30 ביצים בכל צלחת. מוציאים את הבוגרים ומניחים לביצים לגדול עד שהן מגיעות לשלב L4. לאחר מכן, להקרין את התולעים עם אור UV. זה גורם לשברים אקראיים של גדיל כפול בדנ"א הגנומי, כאשר מכונות תיקון הדנ"א של התולעים עשויות לשלב באופן שרירותי את המערך.
לאחר תקופת החלמה של לילה, ספרו את מספר התולעים ששרדו. אחוז קטן של תולעים מתות מצביע על קרינה יעילה. התבונן בדורות הבאים כדי לבודד קווים טרנסגניים משולבים הומוזיגוטיים. בפרוטוקול לדוגמה, נשלב מערך חוץ-כרומוזומלי בעל קצב שידור גבוה הנושא סמן פלואורסצנטי של הזרקה משותפת המתבטא בלוע.
- להעריך את קצב השידור של הקו המהונדס שישולב. עבור כל קו מהונדס, בחרו 10 מבוגרים פלואורסצנטיים על 10 צלחות תרבות נפרדות תחת סטריאוסקופ פלואורסצנטי. תרבית
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים