JoVE Encyclopedia of Experiments
ביולוגיה
0 צפיות • 2:54 דק' • April 30th, 2023
- בתור התחלה, העבירו בעדינות כמה עוברים לצלחת פטרי המכילה מדיום עובר. עכשיו להחזיק את הכוריון עם מלקחיים ולעשות קרע בו עם מלקחיים אחרים.
לאחר מכן, לדחוף בעדינות את העובר דרך הדמעה. הסרת הכוריון מהעובר מאיצה את גדילתו ותנועתו. כדי להיפטר מהפסולת מעבירים את העוברים לצלחת פטרי אחרת המכילה מדיום עוברי באמצעות פיפטה של פסטר.
מניחים את צלחת הפטרי באינקובטור, ונותנים לעוברים לגדול ב 28 מעלות צלזיוס. הגדר שלב מיקרוסקופ מואר מלא מים ל -28 מעלות צלזיוס לפני הניסוי כדי למנוע סטיות הקשורות לטמפרטורה בהתנהגות הזחל.
הניחו את צלחת הפטרי על הבמה והרכיבו במצלמה מעל המנה. לאחר מכן, מרכזו את העובר בשדה הראייה של המצלמה. כעת גע בעדינות בעובר עם מחט קהה, והקלט את תגובת הזחל בתוכנת הקלטת מצלמת הווידאו.
עם הגירוי, העובר מפגין תגובת בריחה עוצמתית - שחיית פרץ יחד עם סיבובים חדים. מדדו את הזמן בין המגע לתאוצת השיא של הזחל במהלך בריחתו.
בפרוטוקול לדוגמה, נתבונן בתגובה של זחלי דגי זברה לגירויים חיצוניים.
- לביצוע הבדיקה, הניחו צלחת פטרי מלאה בכ-25 מיליליטר של תווך עוברי על במה מבוקרת טמפרטורה מוארת המוגדרת לכ-28 מעלות צלזיוס. הרכיבו את המצלמה המהירה מעל המנה. הפעל את תוכנת הקלטת הווידאו והגדר את מהירות הצילום ל -1,000 פריימים לשנייה כדי להבטיח שניתן יהיה לצלם מהירויות שחייה מהירות.
מקמו את העובר במרכז צלחת הפטרי, הנראה בבירור בשדה הראייה. לחץ על הקלט ולאחר מכן ספק גירוי מכנוסנסורי על ידי נגיעה עדינה בעובר עם מחט קהה על גבי הראש.
הפסק את ההקלטה לאחר שהעובר שחה מחוץ לשדה הראייה או חזר לנוח.
- בדיקות חוזרות ונשנות של אותם זחלים עלולות להוביל להתרגל או לקדם חולשת שרירים בחלק מדגמי המחלה, וכתוצאה מכך תגובה מופחתת לגירוי המישוש. לכן, כל עובר צריך להיבדק רק פעם אחת.