בדיקת תגובה אופטוקינטית: שיטה למדידת חדות ראייה בדגי זברה

- אבטחו דג מורדם על פלטפורמה כשעיניו וזמימים משתרעים מעבר לקצה הרציף. מקמו את הדג זקוף בתוך גליל מלא מים בתוך תוף מואר היטב שיכול להסתובב בחופשיות. ברגע שהדג קם לתחייה, מסומן על ידי תנועת זימים ועיניים, הניחו סורג או תבנית של פסים אנכיים לבנים ושחורים לסירוגין לתוך התוף. עכשיו מניחים אוקלודר שחור מוצק על הפסים במבט של עין שמאל.

התחל את הסיבוב ורשום את התגובה האופטוקינטית, OKR, לעין ימין. ה-OKR מורכב מתנועות עיניים רפלקסיביות בתגובה לגירוי חזותי. החליפו את דוגמת המילוי בפסים שחורים ולבנים קטנים יותר ויותר עד שלא תראו עוד תנועת עיניים. בצע את אותו הליך עבור עין שמאל.

כדי לחשב חדות ראייה מונוקולרית, היכולת להבחין בפרטים עדינים, למדוד את המרחק ממרכז עדשת העין לתבנית ואת אורך התבנית הקטנה ביותר של זוג פסים לבנים ושחורים שבהם נצפתה תנועת העין. בפרוטוקול לדוגמה, נשתמש בתגובה אופטוקינטית כדי למדוד חדות ראייה מונוקולרית ודו-עינית בדגי זברה בוגרים.

- מחקרים אופטוקינטיים מתבצעים באמצעות מכשיר הקלטה מותאם אישית באמצעות תוף מסתובב בקוטר 14.5 ס"מ, מיקרוסקופ סטריאופוני עם הגדרות עוצמת אור מתכווננות, מחשב ומצלמה ללכידת תמונות והקלטה. מיקרו-בקר המופעל על ידי מחשב משמש להתאמת מהירות התוף המסתובב וכיווני הסיבוב. באמצעות דגים המתוחזקים בתנאים סטנדרטיים, התחל ניתוח על ידי הרדמת דג ב 0.016% טריקאין במשך שתיים עד שלוש דקות ולאחר מכן הנחתו על פלטפורמה קטנה עם העיניים והזימים תלויים על הקצה.

כדי לשמור על הדג משותק תוך הימנעות מפציעה, הניחו ספוג דק או מגבת על גוף הדג ונעצו שתיים עד שלוש חתיכות קצף מעל הדג, כדי להבטיח שתנועת הזנב מוגבלת. מקם את הדג בתוך מיכל גלילי מלא מים שמתאים לתוף המסתובב של מכשיר ההקלטה OKR. השתמשו במגנטים על הפלטפורמה כדי למקם את הדג זקוף עם העיניים במרחק של כ-7.3 סנטימטרים מקצה התוף.

לאחר שהדג מתעורר לחיים מההרדמה, ונצפו נשימה רגילה ותנועות עיניים אקראיות, הניחו סורג בסיס של 0.07 מחזורים למעלה, או CPD, לתוך התוף המסתובב והפעילו את פקדי המחשב כדי להתחיל בסיבוב ובצילום וידאו. לאחר ש-OKR ראשוני נוצר על ידי סורג הבסיס, השהה את הסיבוב לזמן קצר והחלף את הסורג בסורג קטן יותר עם תדירות מרחבית גבוהה יותר. חזור על תהליך זה עם גרגרים קטנים יותר ברצף עד שכבר לא ניתן יהיה להפעיל אישור. כדי לאמת את אובדן ה-OKR, בעקבות גישת גרם מדרגות שונה, בדוק שוב עם הסורג הקטן ביותר שגרם ל-OKR, ולאחר מכן עם הסורג שלא הצליח לעורר תגובה כדי לאמת את אובדן ה-OKR.

כדי לקבל מדידות חדות מונוקולרית, הניחו אוקלודר פלסטיק שחור על הפסים הסמוכים לעין הנגדית וחזרו על תהליך איסוף הנתונים. לאחר מכן עבור לעין השנייה על ידי מיקום מחדש של הנסתר ולקיחת מדידות. השתמש ברצועת מדידת הייחוס מתחת למכל הדגים כדי לשים לב למרחק של כל עין מהרצועה לביצוע מדידות חדות מדויקות.

כדי לקבוע את חדות הראייה, חשב CPD באמצעות הנוסחה הבאה, כאשר a הוא המרחק ממרכז העדשה לסורג, ו- h הוא אורכו של מחזור אחד של הסורג הקטן ביותר שבו נצפה OKR. למדידות חדות ראייה משולבות, השתמש בממוצע ערך המחושב הן מהעין השמאלית והן מהעין הימנית.