אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 4:22 דק׳ • April 30th, 2023
- מתחילים בהוספת 5 עוברים בתווך E3 לכל באר של צלחת בת 96 בארות, ומסירים את התווך העודף בעזרת פיפטה. הוסף מדיום E3 המכיל קנמיצין לכל באר כדי למנוע זיהום. תנו לעוברים לגדול ב 28 מעלות צלזיוס.
לדלל את דריבית העניין עם ממס מתאים, כגון DMSO, כדי להכין מספר ריכוזים או מנות, ולבדוק את ההשפעה של כל מנה על עוברים מתפתחים. ברגע שהעוברים מגיעים לשלב הרצוי, פיפטה כל תמיסת מלאי לבארות בודדות. מכסים את הצלחת במכסה ומערבלים אותה בעדינות כדי לערבב את התכולה. תנו לעוברים בצלחת הבאר לגדול ב 28 מעלות צלזיוס.
בזמן הרצוי בהתפתחות העוברית, הניחו את צלחת הבאר תחת מיקרוסקופ מתאים כדי לבחון את הפנוטיפ של העוברים. אתה עשוי לראות פנוטיפים כגון אובדן עיניים, עיכוב בגדילה, או אובדן של מלנוציטים בעוברים מתפתחים. בפרוטוקול הבא נבדוק ספריית תרכובות עבור מעכבי מולקולות קטנות של התפתחות המוח הקדמי.
- ספריות מולקולות קטנות מסופקות בדרך כלל בלוח מקור של 96 בארות, כאשר כל תרכובת מאוחסנת ב-DMSO כמלאי של 10 מילימולרי. כ-60 דקות לפני שהעוברים מגיעים לשלב הרצוי, מפשירים מספר מתאים של לוחות 96 בארות המכילים אליציטוטים של מולקולות קטנות. שימו לב למספר הזיהוי הסידורי או האחר של לוחיות המקור. כדי למזער את העיבוי על הצלחות, הפשירו בתא ייבוש המכיל יבש.
סובב בקצרה את הצלחות בצנטריפוגה שולחנית המצוידת במתאם צלחת רב באר. הסר את סר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים