בדיקת תנועת זחלים: שיטה בעלת תפוקה גבוהה לחקר רעילות נוירו-התנהגותית של תרכובת בזחלי דגי זברה

- בתור התחלה, לגדל את העוברים ב-3 צלחות פטרי. הראשון הוא צלחת בקרה המכילה את התמיסה של האנק - תמיסת מלח מאוזנת. בלוחות השני והשלישי יש תמיסה של האנק עם תרכובת נוירוטוקסית פוטנציאלית בריכוזים שונים.

התרכובת הנוירוטוקסית בתמיסת החשיפה חודרת לקרום החיצוני של העובר על ידי דיפוזיה פסיבית ומשנה את תהליכי מערכת העצבים כגון קשב, קואורדינציה ופעילות שרירים. לאחר שהעוברים מתפתחים לזחלים בגיל המתאים, מעבירים כל זחל לבאר בודדת של צלחת באר 48. עקוב אחר מצב הטיפול עבור כל בעל חיים.

מעבירים את צלחת הבאר לפלטפורמת הקלטה ומושכים את הכיסוי כלפי מטה. תן לזחלים להתאקלם במשך 10 דקות. הגדר מחזורים לסירוגין של תקופות אור וחושך באמצעות התוכנה.

זחלי דגי זברה מפגינים בדרך כלל יותר תנועה בחושך ופחות תנועה באור. תעד את המרחק הכולל שעברו הזחלים של קבוצת הביקורת וקבוצות החשיפה בכל תקופה. אם התרכובת היא נוירוטוקסית, הזחלים מראים אפילו יותר תנועה בחושך ובאור מאשר חיות ביקורת.

בפרוטוקול הבא נבצע בדיקות התנהגותיות על זחלי דגי הזברה שנחשפו לתרכובות נוירוטוקסיות.

- לפחות שעתיים לפני ביצוע ניסוי, כוונו את טמפרטורת החדר ל-28 מעלות צלזיוס והוסיפו 800 מיקרוליטר של תמיסת חשיפה לכל באר של מיקרו-צלחת 48 באר. לאחר מכן השתמש פיפטה 1 מיליליטר עם קצה שונה כדי להעביר זחל אחד ב 200 מיקרוליטר של פתרון חשיפה לכל באר של microplate,