אבלציה ממוקדת בכבד: גרימת מוות של הפטוציטים עם מטרונידזול בזחלי דגי זברה טרנסגניים

- להמיס metronidazole במי ביצה המכילים DMSO, ממס, ולהוסיף phenylthiourea, אשר מונע היווצרות פיגמנט בעוברים. מעבירים כמה זחלים בגיל המתאים לצלחות טיפול ובקרה. לאחר מכן, הוסף את הריכוז הרצוי של תמיסת metronidazole לצלחת הבדיקה ומי ביצה המכילים DMSO לצלחת הבקרה.

תנו לזחלים בשתי הצלחות לגדול ב 28 מעלות צלזיוס. הזחלים הטרנסגניים מייצרים ניטרורדוקטאז רק בהפטוציטים, אשר ממיר את המטרונידזול לתרופה ציטוטוקסית, וכתוצאה מכך מוות רק של הפטוציטים הממוקדים. לאחר הטיפול, להסיר את הפתרון metronidazole מן צלחת הטיפול ולשטוף את העוברים עם מי ביצה.

הוסיפו טריקאין כדי להרדים את הזחלים ובדקו אותם תחת מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי לאבלציה חמורה של הפטוציטים - הרס תאי כבד. תוכלו לראות כבד הרבה יותר קטן אצל אנשים מטופלים מאשר אצל אנשים בקבוצת ביקורת. בפרוטוקול לדוגמה, נשתמש במטרונידזול עבור אבלציה של הפטוציטים בזחלי דגי זברה טרנסגניים כדי לחקור התחדשות כבד.

- מעבירים עד 100 עוברים לצלחת פטרי 100 מ"מ המכילה 25 מיליליטר מי ביצה ומניחים את התבשיל על 28 מעלות צלזיוס. כדי לעכב פיגמנטציה, הוסף PTU לתרבית עד 10 שעות לאחר ההפריה. 80 שעות לאחר ההפריה, מרדימים את הזחלים עם טריקאין ומשתמשים במיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי כדי לאסוף את הזחלים החיוביים ל-CFP, ושומרים רק על בעלי החיים עם כבדים בגודל דומה

לאחר מכן החליפו את מי ביצ