הכנת דגימת מיקרוסקופ גיליון אור: הרכבת עוברים חיים של דגי זברה להדמיה ארוכת טווח

- ראשית, הכינו את האגרוז על ידי הוספת מדיום E3, המספק סידן לעוברים הדכוריוניים לאגרוז מותך. לאחר מכן, הוסף MS222 כדי להרדים עוברים. מצננים את תערובת האגרוז ל-18 מעלות, קרוב להתמצקות. בחרו כמה עוברים דכוריוניים המבטאים חלבונים פלואורסצנטיים, והעבירו אותם לתערובת האגרוז.

לאחר מכן, להכניס באופן מלא בוכנה לתוך נימי זכוכית ולצייר עובר אחד, לוודא שהוא נכנס ראש הראשון. לאחר שהאגרוז מתמצק, השתמש בסרט הדבקה כדי להחזיק את הנימים זקופים בכד המכיל מדיום E3. תחתית הנימים הפתוחה מקדמת החלפת גזים לדגימת העובר.

מניחים את הנימים במחזיק הדגימה של מיקרוסקופ פלואורסצנטי של יריעה קלה. הלייזר יוצר יריעת אור דקה, המאפשרת למטרת גילוי - הממוקמת בניצב לדגימה - ללכוד תמונת חתך. בפרוטוקול לדוגמה, נרכיב עוברים של דגי זברה כדי לצלם את העין המתפתחת.

התחילו בהכנת האגרוז. ממיסים אליקוט מוכן של 1 מיליליטר של 1% נקודת התכה נמוכה אגרוז בתווך E3 ב 70 מעלות צלזיוס. לאחר כ-15 דקות, העבירו 600 מיקרוליטר של אגרוז מותך לתוך צינור טרי של 1.5 מיליליטר, והוסיפו 250 מיקרוליטר של E3 בינוני, 50 מיקרוליטר של 0.4% MS222, ו-25 מיקרוליטר של תמיסת מלאי חרוזים פלואורסצנטית מעורבלת.

הניחו את הצינור בגוש חימום בטמפרטורה של כ-39 מעלות צלזיוס, כדי לאפשר לאגרוז להתקרב לנקודת הג'לינג שלו. לאחר מכן, דחפו בוכנות עם קצוות טפלון מטה לתחתית נימי