אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:27 דק׳ • April 30th, 2023
- התחילו עם צלחת פטרי המכילה עוברים בתווך E3. הוסף טריקאין כדי להרדים את העוברים ופנילתיאוריה, תמיסת PTU, כדי לעכב היווצרות פיגמנט. בעזרת מיקרוסקופ מנתח, dechorionate את העוברים.
השתמשו בפיפטת זכוכית כדי להעביר את אחד העוברים הדכוריוניים לצלחת פטרי קטנה עם תחתית זכוכית רדודה היטב במרכז והסירו את התווך העודף. לאחר מכן, הניחו תמיסת אגרוז בריכוז אופטימלי כדי למזער את העיוות והתנועתיות של העובר לתוך צינור מיקרופוגה וחממו אותו. הורידו את הטמפרטורה ל-30 מעלות צלזיוס כדי למנוע פגיעה בעובר בגלל החום.
יוצקים את השכבה הראשונה של agarose על העובר, לחלוטין למלא את הבאר הרדודה. מניחים כיסוי נוספת מעל הבאר ומוסיפים 1% אגרוז על גבי זה. השכבה השנייה מחזיקה את זכוכית הכיסוי במקומה.
לאחר שהאגרוז מתמצק, ממלאים את צלחת הפטרי בתווך E3 המכיל טריקאין. זוהי השכבה השלישית ושומרת על האגרוז והעובר רוויים. בפרוטוקול הבא, נבצע הרכבה שכבתית של אגר של עוברי דגי זברה להדמיית קיטוע זמן ממושך.
- ממש לפני ההרכבה, מחממים את תמיסת האגרוז ל-65 מעלות צלזיוס ואז נותנים לה להתקרר לכ-30 מעלות צלזיוס כדי שהעובר לא ייפגע מהחום ומוסיפים טריקאין לתמיסת האגרוז. השתמשו בכלים תחתונים מזכוכית 35 מ"מ עם תחתית זכוכית מכוסה מספר אפס. מניחים בעדינות עובר dechorionated עם אחד הצדדים הצדיים שלו לכיוון החלק התחתון של הצלחת עם פיפטה זכוכי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים