אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 0:04 דק׳ • April 30th, 2023
- בזחלי דגי זברה, גירוי חזותי יכול להפעיל נוירונים סומטוסנסוריים ולעורר תגובת בריחה. ישנם שני סוגים של נוירונים כאלה הנמצאים בזחל, נוירונים טריגמינליים ורוהון-בירד. אנו יכולים לתמרן את הפעילות של תאי עצב אלה על ידי שינוים כדי לבטא תעלות יונים טרנסגניות רגישות לאור. גישה זו נקראת אופטוגנטיקה.
כדי לבצע טכניקה זו, הרכבו זחל מהונדס כאשר הצד הגבי פונה כלפי מעלה בג'ל אגרוז והניחו אותו מתחת למיקרוסקופ מנתח. השתמש בסכין גילוח כדי לנתק חלק בצורת טריז של אגרוז סביב החלמון והזנב. מלאו את האזור במי ביצה. משכו את האגרוז הרחק מהגזע והזנב של הזחל.
מקם את קצה הכבל האופטי ליד תא המטען שבו נמצא גוף התא של נוירון רוהון-בירד. ספק פולס של אור לייזר כחול. עם החשיפה לאור הכחול, תעלות היונים הטרנסגניות הרגישות לאור בקרום תא העצב נפתחות, ומאפשרות ליונים להיכנס, מה שמפעיל פוטנציאל פעולה שמעורר את תגובת הבריחה. תעד את התנהגות הזחל באמצעות מצלמה מהירה.
בפרוטוקול לדוגמה, נרכיב את הזחלים כדי להפעיל את תא העצב Rohon-Beard, המבטא גרסה של צ'נלרודופסין ונתבונן בתגובה ההתנהגותית.
- הכינו אגרוז 1.5% בהמסה נמוכה במים מזוקקים פעמיים ואחסנו בבלוק חום של 42 מעלות צלזיוס כדי למנוע ממנו להתמצק. בעזרת פיפטה פסטר מזכוכית, מעבירים את אחד הזחלים לפני המסך לתוך צינור של אגרוז 1.5% בהמסה נמוכה עם כמה שפחות מים עובריים כחולים. לא
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים