דיסקציה של עדשת העין: טכניקה לצפייה במורפולוגיה של עדשת דג הזברה

- עין דג זברה כוללת קרנית, סקלרה, עדשה ורשתית. הקרנית היא רקמה שקופה המאפשרת לאור להיכנס לעין. לובן העין הוא רקמה אטומה הנמצאת ברצף עם הקרנית, ויוצרת שכבת הגנה חיצונית. העדשה היא מבנה כדורי הממקד את האור אל הרשתית, שהיא שכבת רקמה רגישה לאור הממירה אור לאות עצבי.

כדי לנתח את העין, מלאו צלחת פטרי בסיליקון ותנו לה לשקוע. עכשיו, מניחים דג מורדם בצלחת ואת הבלו את העיניים באמצעות מיקרו מספריים. העבירו את העיניים לצלחת מלאה PBS כדי לשמור על pH קבוע ברקמה וכוונו את העין כשהצד האחורי פונה כלפי מעלה. החזיקו את העין במלקחיים ובצעו בזהירות שלושה חתכים רדיאליים דרך לובן העין והרשתית.

לאחר מכן, קפלו את הרקמה החוצה כדי לחשוף את העדשה. כעת, מקמו את העין כשהצד הקדמי פונה כלפי מעלה והסירו את לובן העין והרשתית. להוציא את העדשה מהעין המנותחת ולהסיר את כל הרקמה שנותרה סביבה. בפרוטוקול הבא נבצע ניתוחי עדשות של זחלים ודגי זברה בוגרים כדי לנתח את המורפולוגיה של העדשה.

לאחר אישור של הרגעה מספקת עם טריקאין, השתמש במספריים microdissection כדי להסיר מיד את שתי העיניים מדג זברה בוגר או זחל, ומניחים את שתי העיניים לתוך צלחת פטרי 35 מ"מ בהתאמה אישית עם תבנית דיסקציה סיליקון מלא PBS. כדי לקצור את העדשה מדגי זברה בוגרים, הניחו את הצד האחורי של העין כלפי מעלה והכניסו מלקחיים בזווית של פחות מ-45 מעלות דרך דיסק הראייה. השתמשו במספריים לדיסקציה כדי לבצע שניים או שלושה חתכים רדיאליים דרך הרשתית ולובן העין מהדיסק האופטי לאזור הריסים בעין המשותקת וקילפו בחזרה את הרשתית ואת לובן העין כמו עלי כותרת של פרחים. הפוך את העין, הקרנית כלפי מעלה, והשתמש בצד השטוח של המספריים כדי לשתק את העדשה בעקיפין באמצעות מניפולציה של לובן העין והקרנית תוך שימוש במלקחיים כדי למשוך את הרשתית ואת הרקמות המחוברות. לאחר מכן חתוך בזהירות את כל הרקמה העודפת מהעדשה.

עבור קציר עדשת דגי זברה זחליים, משחק עין הזחל בצד האחורי על החלק השטוח של צלחת סיליקון של PBS. והשתמש במחט טונגסטן מושחזת כדי לבצע חתכי רדיו דרך הרשתית ולובן העין תוך כדי השתקת העין עם מחט אחרת או מלקחיים. לאחר מכן גרפו בעדינות את העדשה מהעין המנותקת עם הצד הקהה של מחט חוט טונגסטן בהתאמה אישית ומשכו בזהירות את הרקמה המצורפת.