JoVE Encyclopedia of Experiments
ביולוגיה
0 צפיות • 2:05 דק' • April 30th, 2023
- ראשית, הניחו דג מורדם כשהצד הגבי פונה כלפי מעלה לתוך ספוג שהורטב מראש. לפני אלקטרופורציה, להזריק חומר גנטי לתוך רקמת המטרה, במקרה זה, חלק של המוח הקדמי שנקרא telencephalon. לאחר מכן, לשים כמות קטנה של ג'ל אולטרסאונד על הראש. כמו כן, להחיל את הג'ל על קצה האלקטרודות כדי להקל על פעולה יעילה. הניחו את האלקטרודה החיובית בצד הגחוני של הראש ואת האלקטרודה השלילית בצד הגבי.
עכשיו, לחץ את האלקטרודות בעדינות על הראש ולנהל כמה פולסים של זרם חשמלי. הזרם יוצר נקבוביות זמניות בקרום הפלזמה של תאים מחושמלים והופך אותן לחדירות. הזרם גם מאפשר תנועה של חלקיקים טעונים שלילית, כגון פלסמידים ביטוי DNA או אוליגונוקלאוטידים RNAi הנוכחים בסביבה, לתוך התאים. בדוגמה הבאה, נשתמש באלקטרופורציה כדי להחדיר פלסמיד רקומביננטי לתאים אפנדימוגליאליים, תאי גזע האחראים ליצירת נוירונים חדשים.
- מכסים את הטלנספלון של הדג בכמות קטנה של ג'ל אולטרסאונד. עבור אלקטרופורציה של בעל החיים המוזרק פלסמיד, להסיר את הספוג מן הפליטה להגדיר לטבול את הצד הפנימי של קצות האלקטרודה לתוך ג'ל אולטרסאונד. מקמו את ראש הדג בין האלקטרודות, כאשר האלקטרודה החיובית בצד הגחוני של הראש והאלקטרודה השלילית בצד הגבי. לאחר מכן, בעודכם עדיין מחזיקים את גוף הדג בספוג, לחצו את האלקטרודות בעדינות ובדייקנות כנגד הטלנספלון והפעילו את הזרם עם דוושת הרגל, תוך החזקת האלקטרודות במקומן עד לסיום כל חמשת הפעימות.