אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 2:47 דק׳ • April 30th, 2023
- מעבירים דג מורדם טריקאין לספוג רטוב כשהצד הגבי פונה כלפי מעלה. הניחו את הספוג הנושא את הדג מתחת למיקרוסקופ. מקמו מחט מיקרו-הזרקה בזווית של 45 מעלות מציר הגוף ליד שריר הגב.
לאחר מכן, אתר את המקום מול סנפיר הגב שאינו מכוסה בקשקשים שבו אתה יכול להחדיר את המחט מבלי להפעיל כוח רב. לאחר מכן להחדיר בעדינות את המחט ולהזריק לאט את התרכובת של עניין יחד עם סמן כגון פנול אדום לתוך השריר.
אם תרכובת העניין מכילה חומר גנטי, אלקטרופורציה של התאים על ידי הצבת אלקטרודות משני צדי אתר ההזרקה ומתן הזרם. הזרם הופך את תאי השריר לחדירים, ומסוגלים לקלוט ביעילות את החומר הגנטי. לאחר ההליך, מיד להעביר את הדג לתוך מיכל התאוששות. בפרוטוקול הבא, נבצע זריקה תוך שרירית על דג זברה בוגר כדי לספק חיסון DNA נגד מיקובקטריוזיס.
כדי לשמור על הדג במצב קבוע במהלך ההזרקה, השתמשו בחתיכת ספוג עם חריץ חתוך באמצע כריפוד. משרים היטב את הספוג במי המערכת ומניחים אותו בכלי פטרי. בעזרת כף פלסטיק מעבירים דג זברה מורדם לספוג הרטוב כשצד הגחון של הדג כלפי מטה בחריץ. מתחת למיקרוסקופ, הניחו את המחט בזווית של 45 מעלות קרוב לשריר הגבי של דג הזברה. לאחר מכן מצאו את הנקודה הקטנה ללא קשקשים מול סנפיר הגב ודחפו את המחט לתוך השריר.
אם מורגשת התנגדות כלשהי, נסה נקודה סמוכה. השתמש במתג כף הרגל כדי להזריק בהדרגה את תמיסת הפלסמיד לתוך השריר. תחת המיקרוסקופ, אדום פנול צריך להיות גלוי כפי שהוא נכנס לרקמת השריר.
אלקטרופורציה של הדג מיד לאחר ההזרקה על ידי הצבת אלקטרודות מסוג פינצטה בכל צד של אתר ההזרקה. לחץ על לחצן התחל באלקטרופורטור ותן לו שש פעימות של 40 וולט, 50 אלפיות השנייה. לאחר מכן העבירו בעדינות את הדג למיכל התאוששות. לבסוף, לאחר הרדמת הדג על פי פרוטוקול הטקסט, השתמש באור UV כדי לראות ביטוי EGFP ליד אתר ההזרקה.