דיסקציה מוחית של דגי זברה: טכניקה של נוירוביולוגיה של דגים

- הניחו דג שעבר המתת חסד על מצע דיסקציה והשתמשו בלהב כירורגי כדי לערוף את ראשו של הדג בגובה הזימים. החזיקו את הראש כשהצד הגחוני פונה כלפי מעלה והוציאו את הרקמות הרכות עד שתראו את הכיאזמה האופטית, מבנה העשוי מעצבים אופטיים המחבר בין המוח לעיניים.

חותכים את עצבי הראייה ומסירים את העיניים. כעת, כוונו את הדג כשהצד הגבי פונה כלפי מעלה והוציאו את חלקי הגולגולת כדי לבודד את המוח. העבירו את המוח לצלחת פטרי המכילה מדיום דיסקציה כדי לשמור על pH קבוע של הרקמה. התבוננו בחלקי המוח.

פקעות הריח הן זוג מבנים בקצה הקדמי המחוברים לאיברי הריח המזהים אותות ריח. הטלנספלון כולל אזורים הקשורים לזיכרון. ההבנולה מעבירה מידע מהטלנספלון לחלקים אחרים במוח.

הטקטום האופטי הוא מרכז עיבוד מידע חושי. המוח הקטן ממלא תפקיד בתפקוד מוטורי סומטי ובאיזון. והמדולה מעבירה מידע מחוט השדרה למוח. בפרוטוקול הבא נבודד את המוח מדגי זברה בוגרים כדי לאסוף תאי גזע עצביים מאזורים שונים.

כדי להתחיל, להכין מיטת דיסקציה על ידי מילוי צלחת פטרי עם חבילות ג'ל. לאחר מכן מכסים את המנה במכסה המתאים שלה ודגרים עליה במינוס 20 מעלות צלזיוס. לאחר הקפאת הג'ל, מוציאים את הכלי מהמקפיא ומניחים ריבוע נקי של נייר סינון על גבי המכסה שלו. המשך לעטוף הן את הנייר ואת צלחת עם סרט פלסטיק.

לאחר מכן, לטפל בכל מכשירי micro-dissection עם 70% אתנול. הניחו את הכלים המעוקרים הללו ליד מיקרוסקופ מנתח ומקמו את מיטת הדיסקציה השלמה מתחת למיקרוסקופ עם תאורת סיבים אופטיים. הניחו מיד דגימת ראש שהוכנה מראש על גבי מיטת הדיסקציה וכוונו אותה כך שהצד הגבי שלה פונה כלפי מטה.

לאחר מכן השתמש מספריים כדי לבצע חתך אורך דרך הרקמה הרכה מהחלק האחורי של הראש אל הפה. לאחר מכן, חושפים את בסיס הגולגולת במלקחיים ומסירים את כל הרקמה הסמוכה. לאחר מכן, חתכו את אחד הקירות הרוחביים של הגולגולת החל בחלק האחורי של הראש ונע לכיוון אזור הטקטום של המוח. חזור על תהליך זה עבור הצד הנגדי. המשך לחתוך את עצב הראייה. ואז להסיר את שני הצדדים הצדדיים ביותר של הגולגולת ברמה של טקטום

לבסוף, סובב את צד הגחון של הראש כלפי מעלה. ובעזרת מלקחיים, מקלפים את החלק האפי ביותר של הגולגולת כדי לחשוף את המוח. לאחר מכן, העבירו את המוח ואת כל החלקים הנותרים של הגולגולת לצלחת המכילה מדיום דיסקציה המורכב DMM F12 בתוספת סטרפטומיצין פניצילין. עם ידית פלסטיק של מיקרוסכין מתחת למיקרוסקופ, לנקות את רקמת המוח, נזהר לא לפגוע במבנים עצביים. השתמשו בעד שני מוחות של דגי זברה כדי ליצור נוירוספרות שלמות שמקורן במוח.