מודל קרדיומיופתיה של דג זברה: רעילות לב הנגרמת על ידי תרופות

- קרדיומיופתיה היא מצב שבו שריר הלב נחלש ומאבד את היכולת לשאוב דם. מצב זה יכול להיות משוכפל בדגי זברה. ראשית, לדלל תמיסת מלאי של תרופה האחראית על רעילות לב בתמיסת מלח מאוזנת של הנקס כדי להכין מספר ריכוזי עבודה. לאחר מכן, הניחו דג מורדם טריקאין, בצד הגחון כלפי מעלה, על ספוג אחיזה מתחת למיקרוסקופ מנתח. מקמו את המחט בין סנפירי האגן בזווית של 45 מעלות מאופקית.

עכשיו בעדינות לדחוף את המחט 1 עד 2 מ"מ לתוך חלל הצפק לאט להזריק את הפתרון התרופה. המתינו חמש שניות לפני שאתם שולפים את המחט כדי למנוע מהתמיסה לדלוף החוצה. העבירו מיד את הדגים למיכל נקי המכיל מי מערכת מתוקים. רשום את מספר הדגים שמתים בכל יום עקב רעילות לב חמורה, נזק לשריר הלב. התרופה נקשרת לקולטני מוות הנמצאים על קרום התא קרדיומיוציטים ומפעילה אפופטוזיס, וכתוצאה מכך רעילות לב חמורה.

צור עקומת הישרדות, גרף המציג את הסתברות ההישרדות לאורך זמן עבור כל ריכוז תרופה. בדוגמה, נזריק דוקסורוביצין, או DOX, כדי לגרום לקרדיומיופתיה בדג זברה בוגר בשתי דרכים.

לפני הזרקת DOX לדגים, צמו את הדג במשך 24 שעות. לאחר מכן, קבץ את הדגים. בזמן הרדמה, השתמשו בנייר סינון נקי כדי לייבש כל דג ולמדוד את משקל גופו. הכינו קבוצות דגים שנמצאות כולן בטווח של 10% מאותו משקל גוף, כך שניתן יהיה להזריק לכל קבוצה את אותה מנה של DOX. לאחר מכן, חשב את ריכוז העבודה של DOX עבור כל קבוצה, כך שכל קבוצה מוזרק עם חמישה מיקרוליטר של תמיסה ומקבל את אותו מינון של DOX לפי משקל הגוף.

לאחר מכן, לדלל את מלאי DOX ב 1x HBSS. מערבבים את הדילול עם מערבולת ואז מסובבים את הדילול בפולסים כדי לשמור אותו מאוגד יחד בצינור. להזרקה מכינים משטח הזרקה. בצלחת פטרי נקייה בקוטר 100 מ"מ, מניחים ספוג. בעזרת מיקרוסקופ דיסקציה, חותכים חלל לתוך הספוג כדי להחזיק דג אחד, ארבעה סנטימטרים בדרך כלל עובד.

לאחר מכן, על מחט 34 מד, לחבר מזרק 10 מיקרוליטר. לאחר מכן, שטפו את המחט עם HBSS 1x כדי להסיר בועות או בלוקים מהמזרק והצינורית. עכשיו, בקצרה להרדים את הדג הבוגר עם tricaine. לאחר מכן, השרו את הספוג במי העובר עם טריקאין והעבירו דג על הספוג עם בטנו למעלה להזרקה. כעת, יש להזריק תמיסת DOX תוך צפקית על ידי החדרה מהירה של המחט בזווית של 45 מעלות לקו האמצע בין סנפירי האגן בעומק של כ-1 עד 2 מילימטרים.

לאחר מכן, שחרר לאט את כל פתרון DOX. לפני משיכת המחט, המתן חמש שניות. לחלופין, ניתן למקם את הדג לרוחב עם הפנים מימין. לאחר מכן, הזריקו את הקו הצידי מעל סנפיר האגן כשהשיפוע כלפי מעלה מצביע לכיוון השעה 7 בזווית של 45 מעלות ובעומק של 3 עד 4 מילימטרים. אם אחת משיטות ההזרקה הצליחה, יהיה גוון אדום בבטן.

לאחר ההזרקה, העבירו במהירות את הדג למיכל מעבר נקי מלא במי מערכת מתוקים שם הוא יכול להתאושש. לאחר מכן, לשטוף את המחט עם HBSS ולהמשיך להזריק את הדג הבא. מאוחר יותר, להחזיר את הדג המוזרק למערכת עם זרימת פועל אך נפרד מהמערכת הראשית כדי למנוע זיהום צולב. במשך 24 השעות הבאות, המשיכו לצום את הדגים. במהלך השבוע הראשון, לאחר ההזרקה, הקפד לבדוק את הדג מדי יום ולהסיר כל דג מת.