אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:19 דק׳ • April 30th, 2023
Lentivirus הוא רטרווירוס המכיל חומר גנטי RNA. וירוס זה מספק שיטה יעילה ויציבה להחדרת טרנסגנים לשורות תאים סרטניים. התחל על ידי הוספת neuraminidase לצינור המכיל Lentivirus המבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק, או GFP. שמור את הצינור על 37 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת כדי להגביר את יעילות הקישור של הנגיף.
לאחר מכן, צנטריפוגה צינור המכיל תרחיף תאי גידול כדי ליצור כדור. הוסף מדיה ממוספירה המכילה פוליברן כדי להשעות מחדש את התאים. פוליברן הוא פולימר קטיוני המגביר את יעילות הזיהום הלנטיויראלי. כעת יש לצלחת את המספר האופטימלי של תאי גידול לכל באר בצלחת תרבית רקמה של שש בארות. מוסיפים את הכמות הנדרשת של Lentivirus לכל באר של צלחת התרבית.
מערבלים את הצלחת כדי לערבב את התוכן, ושומרים על 37 מעלות צלזיוס במשך 96 שעות עם אספקה רציפה של פחמן דו חמצני. הלנטיוירוס נכנס לתא ומשחרר RNA. התעתיק ההפוך הנגיפי ממיר את הרנ"א לדנ"א דו-גדילי המשתלב בגנום המארח. הניחו את הצלחת תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי ועקבו אחר תאים להתמרה מוצלחת. התאים המומרים פלואורסים עקב ביטוי GFP.
בפרוטוקול לדוגמה, נבצע התמרה של תאי גידול מנותקים PDX עם וקטורים Lentiviral.
כדי להתמיר את תאי הגידול, צנטריפוגה את התאים המבודדים להשעיה בשני מיליליטר של תווך ממוספירה. לאחר הספירה, צנטריפוגה את התאים שוב להשעות את הגלולה בשני מיליליטר של מדיום ממוספיר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים