אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:19 דק׳ • April 30th, 2023
התחילו על ידי הנחת חתיכת שעוות עצם בשתי צלחות תרבית תאים המסומנות כבדיקה ובקרה. פיפטה כמות מתאימה של ביולומינסנציה המבטאת תאי סרטן שד בכל מרכז צלחת ודוגרת על הלוחות למשך זמן מסוים כדי לסייע בחיבור תאים. הניחו עציל עצם קטן על שעוות העצם בצלחת הבדיקה ואבטחו אותו על ידי הפעלת לחץ.
מוזגים באיטיות מדיום תרבית תאים עם נסיוב בקר עוברי, תוסף גדילה, לכל צד צלחת כדי לטבול את החציל ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך זמן מסוים. רקמת העצם בצלחת הבדיקה משחררת גורמים מסיסים, כגון ציטוקינים וקינאז SRC, אשר מושכים תאי סרטן השד, וכתוצאה מכך נדידתם. הוסיפו מצע לכל צלחת והניחו את הלוחות על תא הדמיה ביולומינסנציאלי.
התא הסרטני המבטא חלבון ביולומינסנטי מחמצן את המצע ופולט אור. כמת את ההתפשטות על ידי מדידת סך כל הפוטונים הנפלטים מכל תא באמצעות התוכנה. תאים סרטניים בצלחת הבדיקה צריכים להתרבות מהר יותר מאשר התאים בצלחת הבקרה. בפרוטוקול הבא, נבצע תרבית משותפת של תאי סרטן השד הסמוכים לצמחי עצם הירך כדי למדוד את התפשטות תאי השד.
עבור ניסוי זה, להכין תרחיף תאי סרטן השד עם 100,000 תאים לכל 50 מיקרוליטר של DMEM בתוספת 10% FBS. בנוסף, הכינו פקקים של שעוות עצם לשיתוק שברי העצם. בעזרת הקצוות החתוכים של קצה מיקרופיפטה, אחסנו את התקעים בצלחת פטרי. לאחר מכן בעזרת מלקחיים מעבירים את התקעים לצלחת בעלת שש בארות ובא
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים