תרבית משותפת תלת-ממדית עם אינטראקציה ישירה: טיפוח משותף של תאים סרטניים עם מונוציטים כדי לחקור את האינטראקציה שלהם

בתור התחלה, הוסיפו DQ collagen IV, מצע חלבון מרוהה בצבע פלואורסצנטי לתמצית מטריצה חוץ-תאית או ECME. יוצקים תמצית זו לתוך כל באר של שתי באר להחליק. תייגו את הראשון כתרבות משותפת, את השני כשליטה. הוסף כמות מתאימה של תרחיף תאים סרטניים המסומן באופן פלואורסצנטי לבארות, ודגר על המגלשה ב -37 מעלות צלזיוס למשך הזמן הרצוי כדי לקדם את חיבור התא.

הוסף כמות נדרשת של תרחיף תאי מונוציטים לבאר הראשונה. תן ECME להתמצק ב 37 מעלות צלזיוס. יוצקים יחסים שווים של מדיה של תרבית תאים סרטניים ומונוציטים לכל באר ודגרים על המגלשה ב 37 מעלות צלזיוס למשך הזמן הרצוי בסביבת פחמן דו חמצני. בבאר התרבית המשותפת, תאים סרטניים מפרישים חלבונים כגון מונוציטים לחלבון כימואטרקנטי כדי למשוך מונוציטים.

לעומת זאת, מונוציטים מייצרים מטריצה metalloproteinase או MMP, כדי לפרק את הקולגן, קידום פלישה תאים סרטניים. התבונן בשקופית תחת מיקרוסקופ קונפוקלי. פירוק הקולגן DQ פולט פלואורסצנטיות אשר ניתן לראות יותר בתאי תרבית משותפת המעידה על אינטראקציה בין תאים, בעוד פחות בתאי ביקורת. בפרוטוקול הבא, נבצע תרבית משותפת של תאי סרטן השד עם מונוציטים כדי לחקור את האינטראקציה ביניהם.

כדי לסמן תאי BRC ומונוציטים עם קומרין ורודמין הזמינים מסחרית לפני תרבית תאים, הכינו מונושכבה של פי שניים 10 לששת תאי BRC המעניינים והחליפו את המדיום הסטנדרטי ב