אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:45 דק׳ • April 30th, 2023
זריקה אינטרדוקטלית היא טכניקה של מתן תערובת הזרקה שעשויה להכיל תאים סרטניים, וקטורי ביטוי, או סוכן טיפולי בתוספת צבע נותב לתוך צינורות של בלוטת החלב.
עבור הליך זה, לטעון מזרק עם תערובת ההזרקה. לאחר מכן, הניחו צד גחוני של עכבר מורדם על מיטת ניתוח. בצע חתך על העור בין זוג מפשעתי או חמישי של בלוטות החלב. בזהירות להפריד את דש העור מן הצפק הקודקוד כדי לדמיין את העץ ductal.
בעזרת מלקחיים, הרימו את הפטמה וחתכו בזהירות את חלקה החיצוני כדי לראות את פתח הצינור. השתמש בפינצטה כדי להרים את קצה דש העור, והכנס בעדינות את מחט המזרק לתוך הפטמה כדי לספק את תערובת ההזרקה. עקוב אחר התנועה של צבע נותב לתוך עץ ductal החלב. הצבע מתפשט בעץ הצינור מבלי לדלוף לתוך הסטרומה, מה שמעיד על הזרקה מוצלחת.
המתן מספר שניות כדי למנוע שפיכה, ולאחר מכן לאט להסיר את המחט מאתר ההזרקה. סגור את החתך עם תפס הפצע. בפרוטוקול הבא, נבצע הזרקה intraductal כדי לספק Cre ביטוי אדנווירוס לתוך בלוטת החלב עכבר.
השתמש בטכניקות אספטיות לאורך כל ההליך הכירורגי. בצע אתר חתך על העור באורך של כסנטימטר אחד בין שתי בלוטות החלב המפשעה הרביעית. בזהירות להפריד את דש העור מן הצפק הקודקוד, כדי לדמיין את עץ ductal החלב.
החזיקו בזהירות את הפטמה עם מלקחיים של שענים כדי להסיר את הפטמה החיצונית מבלי לחתוך עור סמוך באמצעות מספריים מיקרו-דיסקציה. טען כשלושה עד חמישה מיקרוליטרים של תערובת הזרקת Cre adenovirus לתוך מזרק המילטון 25 מיקרוליטר עם מחט רכזת מתכת 33 מד מודבק.
העריכו את נפח תערובת ההזרקה במזרק בהתבסס על הצבע הכחול הכלול בתערובת. החזיקו בעדינות את קצה דש העור עם פינצטה מעוקלת עדינה והזריקו את תערובת הזרקת ה-Cre adenovirus באיטיות לתוך הפטמה תוך מעקב אחר התפשטות הצבע הכחול לתוך עץ צינור החלב. שמור על קצב ההזרקה איטי ככל האפשר כדי למנוע נזק לומן ductal.
הזרקה אינטרדוקטלית מוצלחת מסומנת על ידי הזרקת נוזלים המתפשטים לאורך כל עץ הצינור מבלי לדלוף לתא הסטרומה. משכו בעדינות את המחט מהפטמה כדי למנוע דליפה של הנוזל המוזרק. בדוק את הצד הדיסטלי של בלוטת החלב או את האזור שמסביב של הפטמה המוזרקת.
פיזור צבע לתוך הסטרומה הסמוכה, כפי שמוצג כאן, מצביע על הזרקת כרית שומן חלב ולא על הזרקה אינטרדוקטלית מוצלחת. סגור את פצעי הניתוח ואת העור עם קליפסים לפצע.
הוציאו את העכבר מההרדמה והניחו אותו על כרית חימום בתוך כלוב נקי להתאוששות. עקוב אחר התפתחות גידול החלב כמתואר בפרוטוקול הטקסט.