JoVE Encyclopedia of Experiments
מחקר סרטן
0 צפיות • 2:25 דק' • April 30th, 2023
עוברי דגי זברה שימושיים בחקר פלישת תאים סרטניים. הכן מודלים של xenograft על ידי הזרקת תאים סרטניים גרורתיים מסומנים פלואורסצנטית ותאים לא סרטניים לתוך החלל perivitelline של שני עוברים טרנסגניים. החלל הפריביטלי הוא רווח בין פרידרם העובר לבין שק החלמון. תנו לעוברים לגדול לתקופה הרצויה.
במהלך תקופה זו, תאים סרטניים גרורתיים מתחלקים באגרסיביות באתר ההזרקה בעוד תאים לא סרטניים נשארים יציבים. לאחר הדגירה, השתמשו בפיפט פסטר כדי להעביר עוברים לצלחת תרחיף תחתית זכוכית. יש להסיר עודפי מי ביצית ולמקם את העוברים בתנוחה הרצויה לצורך הדמיה. שמרו על כיסוי על גבי התבשיל והניחו את התבשיל תחת מיקרוסקופ שדה בהיר.
צלם תמונות ונתח את ההתנהגות הפולשנית של שני סוגי התאים. תאים סרטניים גרורתיים נוטים לפלוש לכלי הדם ממקום ההזרקה. הם נעים לאורך מחזור הדם, ואז פולשים לתוך הרקמה שמסביב כדי להתרבות. לעומת זאת, התאים הלא סרטניים נשארים במקום ההזרקה. בפרוטוקול לדוגמה, אנו מזריקים תאי סרטן שד לתוך החלל perivitelline ואת הצינור של Cuvier במודלים xenograft של דגי זברה כדי לחקור גרורות.
כדי לדמיין גרורות, עם פיפטה פסטר, להעביר את העובר דג זברה מוזרק לצלחת פוליסטירן תחתית זכוכית ולהסיר עודפי מי ביצה. דמיינו את כל גוף העובר במיקרוסקופ קונפוקלי המוגדר להגדלה נמוכה כדי לקבל תבנית כללית של הפצת תאי גידול.
השתמש בלייזר של 488 ננומטר כדי להמחיש את כלי הדם של עובר דג הזברה ובלייזר של 543 ננומטר כדי להמחיש תאי גידול מושתלים המסומנים בטוש פלואורסצנטי אדום. לאחר מכן, סרוק את העובר בשמונה עד עשרה שלבים כדי לרכוש תמונה באיכות גבוהה.