דיסוציאציה מכנית: שיטה להשגת תאים בני קיימא מרקמה

ראשית, שקלו שבר רקמה ומדדו את אורכו, רוחבו וגובהו. מניחים את הרקמה בצלחת תרבית עם מדיום תרבית וחותכים אותה לחתיכות קטנות בעזרת אזמל. מעבירים הכל לצינור C להומוגניזציה באמצעות פיפטה של פסטר.

הכניסו את הצינור לדיסוציאטור מכני והפעילו מחזורים לפי הצורך. המנגנון משתמש בכוחות מכניים כדי לחלץ תאים בודדים בני קיימא מדגימת הרקמה תוך שמירה על שלמות התאים, כולל חלבוני פני השטח. דקל את ההומוגנט באמצעות מסננת תאים המקובעת על צינור צנטריפוגה.

הומוגניזציה מחדש של הרקמה הנותרת ומתח את ההומוגנט דרך מסננת התא לתוך הצינור. צנטריפוגה את ההומוגנט ולהסיר את supernatant. כעת, השהה מחדש את כדורית התא בתווך התרבית והעבר כמות קטנה של תרחיף התא לצינור המכיל כתם כחול טריפאן.

לאחר הצביעה, להעביר את התאים על שקופית hemocytometer. ספור את התאים השקופים. התאים המתים סופגים את הכתם, מכיוון שקרום התא שלהם אינו שלם. בפרוטוקול הבא, נבצע דיסוציאציה לא אנזימטית של רקמה אנושית טרייה לניתוח כמותי ואיכותי של תאי CD45+.

- התחל בשקילת דגימת הרקמה ולאחר מכן מדידת אורך, רוחב וגובה הרקמה. לאחר מכן העבירו את שבר הרקמה לצלחת פטרי קטנה המכילה מיליליטר אחד של תווך התאים ההמטופויטיים המתאים המוגדר כימית, ללא סרום, והשתמשו באזמל סטרילי כדי לחתוך את הדגימות לחתיכות קטנות של 1 עד 2 מילימטר מרובע. לאחר מכן, להעביר את תוכן הכלים לתוך צ