בדיקת היווצרות מושבת אגר רכה: שיטה לבדיקת השפעות של תרכובות חדשות על התפשטות תאים סרטניים

כדי להתחיל, לקחת ריכוז מתאים של agarose מותך בצינור חרוטי ולהוסיף כמות רצויה של מדיום תרבית חמה אליו. הפוך בעדינות כדי לערבב את התוכן. מוסיפים את התערובת לכל באר של צלחת שש בארות, ומניחים לה להתמצק. זוהי השכבה התחתונה. לאחר מכן, לטפל בתאים סרטניים עם דריבית של עניין ולהוסיף את הריכוז הנדרש של agarose.

עכשיו, יוצקים תערובת זו המכילה את המספר הרצוי של תאים למיליליטר לתוך כל באר. זוהי שכבה המכילה תאים. לאחר שהתווך מתמצק, דוגרים על הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס במשך שבוע. מכינים שכבת הזנה על ידי ערבוב אגרוז למדיום ומשלימים תערובת זו עם תרכובת העניין. מוסיפים בעדינות את שכבת ההזנה לכל באר, מאפשרים לה להתמצק ודוגרים על הצלחת בחום של 37 מעלות.

חזור על הליך האכלה זה מדי שבוע כדי לחדש את התאים עם המדיום עד להיווצרות מושבות. אם דריבית הריבית היא מעכבת גידול, היא תדכא את צמיחת התאים וכתוצאה מכך מעט מושבות בבארות. בפרוטוקול הבא, נבצע בדיקת היווצרות מושבת אגר רכה כדי לחקור את ההשפעה של מעכבי PADI על הגידול של תאי סרטן השד.

התחל הליך זה על ידי הכנת 3% 2-hydroxyethyl agarose. לתוך בקבוק זכוכית נקי ויבש 100 מיליליטר, להוסיף 0.9 גרם של 2-hydroxyethyl agarose ואחריו 30 מיליליטר של מים מזוקקים. חממו את התערובת במיקרוגל למשך 15 שניות וערבלו בעדינות. חזור על שלב זה עד שאבקת האגרוז מתמוססת לחלוטין. לאחר מכן,