הזרקת ורידים בזנב: שיטה למתן תאים סרטניים למחקרים גרורתיים במודל עכבר

התחילו בהוספת טריפסין לצלחת פטרי המכילה תאי סרטן שד מסומנים כדי לנתק אותם מפני השטח. הוסף מדיום המכיל סרום כדי לעצור את הפעולה של טריפסין. מעבירים את מתלה התא לצינור חרוטי וצנטריפוגות אותו לתא כדורי.

השליכו את הסופרנאטנט והשהו מחדש את התאים במי מלח חוצצי פוספט. הניחו את הצינור על קרח כדי להאט את חילוף החומרים בתאים. טען את מתלה התא המכיל את כמות התאים הנדרשת במזרק נעילת Luer וקבע עליו מחט.

הניחו עכבר במתקן ריסון מכרסם עם זנבו בחוץ. טובלים את הזנב במים חמים כדי להרחיב את הוורידים. ישנם שני ורידים בצדדים הרוחביים ועורק בצד הגחוני של הזנב. נגבו את הזנב באלכוהול, הכניסו את המחט והזריקו את מתלה התא.

ברגע שהם מגיעים לזרם הדם, התאים הסרטניים המוזרקים פולשים לאיברים, כגון הריאות, ומתרבים. לאט להסיר את המחט ולהשתמש גזה סטרילית באתר ההזרקה כדי להפעיל לחץ לעצור דימום. להחזיר את העכבר לכלוב שלו ולהבטיח התאוששות מלאה. בפרוטוקול הבא אנו מדגימים הזרקה של תאי סרטן גרורתיים מסומנים למודל עכברי כדי לכמת גרורות ונשאות של סרטן השד.

שאפו את המדיה ושטפו את לוחות התאים עם 1X PBS. טריפסינזציה של התאים עם 5 מיליליטר טריפסין לכל צלחת של 15 ס"מ למשך שתיים עד חמש דקות ולהעביר את כל התאים לצינור חרוט. שטפו את התאים הנותרים מצלחת תרבית הרקמה עם מספיק מצע צמיחה שלם כדי להרוות את הטריפסין. מוסיפים את הכביסה לאותו צינור חרוט. ספור את התאים באמצעות מונה תאים אוטומטי כדי לקבוע את מספר התאים הכולל.

לאחר מכן, צנטריפוגו את התאים ב 122 כפול G במשך שלוש דקות ושאפו את הסופרנטנט. להשהות מחדש את התאים ב 1X PBS בריכוז הרצוי. כאן, 25,000 תאים מוזרקים לכל עכבר ב -100 מיקרוליטר של PBS, כך שהתאים המרחפים הם ב -250,000 תאים למיליליטר. שמור את מתלי התא על קרח עד ההזרקה.

עבודה על מכסה מנוע במתקן בעלי חיים, בעדינות, אבל ביסודיות לערבב את התאים על ידי היפוך הצינור או באמצעות מזרק 1 מיליליטר כדי להבטיח כי הם תלויים מחדש באופן אחיד. כעת, יש להעמיס מזרק Luer Lock בגודל 1 מיליליטר עם מתלה תאים ולסלק בועות אוויר עודפות. מניחים מחט בגודל 1/2 אינץ' ברוחב 30 אינץ' על המזרק עם השיפוע כלפי מעלה ומסלקים בועות אוויר.

הניחו את העכבר בעדינות בריסון מכרסמים. וריד הזנב לרוחב צריך להיות גלוי ומורחב. אם לא, צבטו בעדינות את בסיס הזנב וטבלו את הזנב במי ברז חמים כדי להרחיב את הוורידים. השתמשו במגבון אלכוהול כדי לנקות את הזנב. לאחר מכן הכנס את המחט לווריד הזנב, צד משופע כלפי מעלה, והזריק 100 מיקרוליטר של תרחיף התא. אם המחט מוחדרת כראוי לתוך הווריד, זה צריך בקלות להחליק מעט קדימה ואחורה, ולא צריכה להיות התנגדות כאשר הבוכנה נדחפת.

זריקות מוצלחות אמורות לגרום גם לסומק, שבו הצבע הכחול של הווריד הופך לבן למשך מספר שניות לאחר ההזרקה. לאט להסיר את המחט, באמצעות גזה סטרילית, להפעיל לחץ על אתר ההזרקה כדי לעצור כל דימום. החזר את העכבר לכלוב שלו והצג במשך 15 דקות כדי להבטיח התאוששות מלאה.