רפידות שומן חלב דה-צלולריות: הפקת הידרוג'לים מטריצה חוץ-תאית מפדים לשומן חלב
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 6:41 דק׳ • April 30th, 2023
ראשית, הניחו רפידות שומן חלב או MFPs בצלחת עם תמיסת טריפסין-EDTA ודגרו למשך הזמן הרצוי כדי לשבור את הידבקויות מטריצת התא. שטפו את המדפסות הרב-תכליתיות במים נטולי יונים, וסננו אותן דרך מסננת. מניחים רקמות בכוס עם מוט ערבוב ומוסיפים Triton X-100. יש לערבב לתאי ליזה מבלי להשפיע על גורמי הגדילה במטריצה החוץ תאית של הרקמה.
מסננים את המדפסות הרב-תכליתיות ושוטפים במים נטולי יונים. מעבירים רקמות בחזרה לכד, ומוסיפים חומצה דאוקסיקולית כדי לליז את התאים הנותרים. לאחר מכן, סננו את המדפסות הרב-תכליתיות והניחו בכד המכיל מים שעברו דה-יוניזציה עם פניצילין-סטרפטומיצין כדי למנוע זיהום. דוגרים על הכד ב-4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
מסננים את המדפסות הרב-תכליתיות ומניחים אותן בתוך המכילה אתנול וחומצה פראצטית. החומצה הפראצטית מגבירה את הנוקשות של המטריצה החוץ תאית של הרקמה. מערבבים זמן מה וחוזרים על שלב המאמץ. שטפו את המדפסות הרב-תכליתיות עם PBS ולאחר מכן עם מים שעברו דה-יוניזציה. העבירו את המדפסות הרב-תכליתיות המתוחות לכוס המכילה פרופאן-1-ol.
מערבבים במשך זמן מה, מסננים את התוכן ושוטפים מדפסות משולבות במים נטולי יונים. יבשו את המדפסות הרב-תכליתיות ואחסנו בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס. בפרוטוקול הבא, נבצע decellularization של כריות שומן חלב murine.
ראשית, הניחו את המדפסות המשולבות בצלחות של שישה סנטי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים