CTC Immunofluorescence Assay : טכניקה לאפיון תאי גידול במחזור הדם
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:05 דק׳ • April 30th, 2023
- כדי להתחיל, לדלל את תאי הגידול המבודדים במחזור הדם או CTCs לריכוז הנדרש באמצעות תמיסה אנטי קשירה המגנה על התאים מפני גזירת נוזלים ונזקי לחץ. לאחר מכן, הרכיבו שקופית מיקרוסקופ מצופה פולי-ליזין וכרטיס מסנן ציטוצנטריפוגה למכלול משפך ציטוצנטריפוגה. העבר את מתלה התא לתוך יציאת המשפך של המכלול ולאחר מכן cytocentrifugation.
הכוח הצנטריפוגלי מרכז ומפקיד שכבה אחת של תאים על שטח מעגלי במגלשה. בודדו את האזור שהושקע בתאים באמצעות מבודד סיליקון. לאחר הייבוש, לתקן את התאים באמצעות paraformaldehyde. לאחר מכן, דגרו על התאים בתמיסת חסימה מתאימה המכילה חלבונים הנקשרים בקלות לכל אתרי קישור לא ספציפיים על פני התא.
כעת, תייגו את התאים בתמיסת נוגדנים בעלת תווית פלואורסצנטית מעניינת. הנוגדנים המתויגים בפלואורופור מזהים ונקשרים למולקולות מטרה ספציפיות על פני התא. שטפו את הדגימה כדי להסיר נוגדנים לא קשורים. הוסף פתרון הרכבה כדי להכין את הדגימה להדמיה.
השתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לזהות את האור הנפלט על ידי מצומדות נוגדן-פלואורופור הקשורות לאנטיגני המטרה ב- CTCs. בפרוטוקול זה, נבצע בדיקת אימונופלואורסנציה של CTCs בדגימות של חולי סרטן ריאה מסוג תאים שאינם קטנים.
- עבור צביעה אימונופלואורסצנטית, לספור את התאים בהמוציטומטר, ולדלל את הדגימה המועשרת ל 1 כפול 10 לתאים החמישי לכל 100 מיקרוליטר של ריכוז תמיסה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים