תרבית תלת-ממדית של תאי קרצינומה של ריאות: שיטה לחקר אינטראקציות בין תאים למטריצות

- ראשית, הפשירו בקבוקונים של מטריצת קרום מרתף בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה. מטריצת קרום המרתף מורכבת מחלבונים הנמצאים במיקרו-סביבה של הגידול המסייעים בשמירה על מאפייני התאים הסרטניים במבחנה. למחרת, הניחו את בקבוקון מטריצת קרום המרתף על קרח כדי לשמור על המטריצה במצב נוזלי. קח תאי סרטן ריאות לתוך צינור צנטריפוגה מקורר מראש וצנטריפוגה ב 4 מעלות צלזיוס. שאפו את הסופרנאטנט וטפחו בעדינות כדי לעקור את הגלולה ולהניח אותה על קרח. לאחר מכן, הוסף נפח מתאים של תערובת קרום מרתף לתוך צינור זה וערבב כדי ליצור תרחיף תא אחיד. בצע את כל השלבים בטמפרטורה נמוכה כדי למנוע מממברנת המרתף להצטמרר.

מעבירים נפח מתאים של מתלה מטריצת התא למרכז כל באר בצלחת באר מקוררת מראש, המכסה את כל הבאר. דוגרים על צלחת הבאר כדי שהמטריצה תתמצק. בחנו תחת מיקרוסקופ כדי להבטיח פיזור אחיד של התאים בתוך המטריצה. מוסיפים תרבית תלת ממדית שלמה לכל באר ודגרים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. מדיום זה מאפשר אינטראקציות מטריצת תאים. לפיכך, התאים יוצרים אורגנואידים עם מבנים דמויי אצינר. בפרוטוקול הבא נבצע תרבית תלת-ממדית של תאי קרצינומה ריאתיים TUM622.

כדי להתחיל, להפשיר בקבוקונים של מטריצת קרום מרתף במקרר 4 מעלות צלזיוס לילה. מצננים שתי פיפטות פלסטיק מיליליטר וקצוות במינוס 20 מעלות צלזיוס למשך הלילה. למחרת, חממו את הריאגנטים המ