תרבית משותפת תלת ממדית של תאי סרטן ריאות עם CAFs: מערכת מודל חוץ גופית לחקר התקדמות הגידול
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:36 דק׳ • April 30th, 2023
- בתרביות משותפות תלת-ממדיות, סוגי תאים מרובים גדלים יחד במטריצות כמו מטריצת קרום מרתף, המחקה את המיקרו-סביבה הטבעית של מטריצה חוץ-תאית, ומאפשרת אינטראקציות תא-תא ומטריצת תאים. כדי לבסס תרבית משותפת תלת-ממדית משובצת, הכינו תרחיף אחיד של פיברובלסטים הקשורים לסרטן או CAFs ותאי סרטן ריאה שנלקחו לשניים הוא ליחס אחד, במטריצת קרום המרתף. שמרו על המתלים על קרח כדי למנוע התמצקות מטריצה בטמפרטורות הסביבה.
מעבירים נפח מתאים של תרחיף לתוך צלחת תרבית תאים. דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך הזמן הדרוש להטמעה משותפת של התאים במטריצה. כדי לבסס תרבית משותפת תלת-ממדית, הכינו תרחיף של תאי סרטן הריאה במטריצת קרום מרתף, בצפיפות התא הרצויה. שמור על המתלה על קרח. פיפטה נפח מתאים של תרחיף מטריצת תאים זה לתוך צלחת תרבית תאים. דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס כדי להקים את מונוקולטורה התאים הסרטניים המשובצים.
לאחר מכן להעביר את הנפח הרצוי של CAFs התלויים במדיה תרבית מועדפת, על פני התאים הסרטניים המשובצים. בתרביות משותפות תלת-ממדיות, CAFs מגבירים את היווצרות התאים הסרטניים ומושכים תאים סרטניים, וכתוצאה מכך נוצרים מבנים דמויי דמעות. בפרוטוקול זה, נבצע תרבית משותפת של תאי סרטן הריאה TUM622 ו-CAFs כדי לחקור את האינטראקציה ביניהם.
- לאחר הכנת תרחיפים של תאים של TUM622 ו-CAFs, כפי שתואר קודם לכן, יש לספור
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים