אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:38 דק׳ • April 30th, 2023
- בתור התחלה, זרעו את תאי סרטן הריאה בבקבוק T המכיל תרבית רקמה ותנו לו לגדול בן לילה. לאחר מכן, להשעות miRNA עם סוכן transfecting לתוך מדיום transfecting. הסר מדיה והוסף מדיום מדביק שיכניס miRNA לתאים סרטניים. miRNA היא מולקולת RNA לא מקודדת שנקשרת לרצף mRNA משלים וחוסמת ביטוי גנים. לדגור על הבקבוק למשך הזמן הרצוי.
לאחר מכן, להחליף את המדיה עם מדיה תרבית רקמות ולגדול בן לילה. הוסף טריפסין לדיסוציאציה של תאים. מעבירים את התערובת לצינור צנטריפוגה המכיל PBS וצנטריפוגה אותה. הסר את supernatant ולהוסיף חיץ lysis לתאי lyse ולהוסיף אתנול טהור במיוחד עבור משקעים. מניחים את התערובת בעמוד הפרדה לטיהור חומצת גרעין וצנטריפוגה.
הסר את הזרימה והוסף חיץ שטיפה כדי להסיר את קרום התא הליזד והצנטריפוגה. הסר את מאגר השטיפה והוסף DNase עם מאגר עיכול DNase כדי להסיר DNA מהדגימה והצנטריפוגה. הוסף חיץ הכנת RNA כדי לבודד RNA וצנטריפוגה. אספו את הרנ"א שנמצא בסופרנטנט. בפרוטוקול הבא נבצע מיצוי RNA מתאי סרטן ריאה שטופלו ב-miRNA.
- ראשית, זרעו את התאים הסרטניים בבקבוק מתאים המספיק למיצוי RNA וחלבונים לביצוע ביטוי גנים באמצעות qPCR או ניתוח microarray . לאחר מכן יש לדגור למשך הלילה עם תוספת של 10% FBS ו-1% פניצילין-סטרפטומיצין.
למחרת מכינים את דגימת המיקרו-רנ"א לטרנספקציה על ידי דילול מיקרו-רנ"א 143 ומיקרו-רנ"א
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים