ניתוח מחזור התא: גישה לחקר ויסות מחזור התא של תאי סרטן ריאה נגועים ב- miRNA

0 צפיות3:34 דק' • April 30th, 2023

- מיקרו-רנ"א או miRNA הוא רנ"א קטן שאינו מקודד. לאחר טרנספקציה של mRNA או החדרתו לתא, הוא יוצר קומפלקס חלבון miRNA. הקומפלקס מכוון ונקשר ל-mRNA ספציפי ומווסת באופן שלילי את ביטויו, ועוצר את התקדמות מחזור התא.

כדי להתחיל את הניתוח, הוסף קיבוע מייבש מתאים לתרבית שנקטפה של תאי סרטן ריאות נגועים miRNA. הקיבוע משמר את התאים וגם מחלחל את קרום התא. טפלו בתאים בתערובת של פרופידיום יודי, צבע פלואורסצנטי של חומצת גרעין ואנזים ריבונוקלאז.

הצבע נכנס לתאים ומכתים גם את הדנ"א וגם את הרנ"א. האנזימים מפרקים באופן ספציפי את הרנ"א ומאפשרים כימות DNA אופטימלי. השתמש בציטומטר זרימה כדי לקבוע את שיעור התאים שנעצרו בשלבים שונים של מחזור התא בהתבסס על עוצמת הפלואורסצנטיות של תאים בודדים.

התאים בשלבי מנוחה וגדילה הם בעלי תכולת דנ"א נמוכה יותר ולכן עוצמת פלואורסצנטיות נמוכה יותר. התאים בשלב גאפ 2 עם כמות כפולה של דנ"א מייצרים עוצמת פלואורסצנטיות כפולה. התאים בשלב סינתזת הדנ"א גורמים לערך פלואורסצנטי בין שתי האוכלוסיות האחרות. הפרוטוקול הבא ינתח את ויסות מחזור התא של תאי סרטן ריאות שטופלו ב-miRNA על ידי מדידת תכולת הדנ"א שלהם באמצעות צביעת PI וציטומטריית זרימה.

- הדבק את התאים כמתואר בחלק הקודם של סרטון זה. קצור תאים מכל דגימה בצינורות סטריליים נפרדים של 15 מיליליטר על ידי טריפסיניזציה. לאחר מכן, לשטוף את התאים פעמיים עם 1X PBS על ידי צנטריפוגה ב 751 גרם במשך 5 דקות ולאחר מכן להסיר את supernatant. השהה ושבור את הגלולה על ידי הוספת 200 מיקרוליטר קר כקרח 1X PBS באמצעות פיפטינג.

הוסף 2 מיליליטר של אתנול קר כקרח 70% טיפה לצינור תוך ערבול הצינור בעדינות כדי לתקן את התאים. לדגור צינורות במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר ומניחים אותם 4 מעלות צלזיוס במשך 1 שעה. הסר את הצינורות מ 4 מעלות צלזיוס וצנטריפוגה.

הוסף 2 מ"ל PBS קר כקרח ומערבולת ולאחר מכן להסיר את supernatant על ידי צנטריפוגה. יש להוסיף 500 מיקרוליטר של 1X PBS המכיל פרופידיום יודיד וריבונוקלאז A בריכוזים 50 ו-200 מיקרוגרם למיליליטר, בהתאמה, בכל דגימה ולדגור במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. העבירו דגימות לצינורות מתאימים המגנים מפני אור ופעלו על ציטומטר זרימה.

08:52

מעקב זמני של התקדמות תא מחזור שימוש cytometry הזרימה ללא הצורך בסנכרון

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:44

ניתוח מבוסס Cytometry Imaging- והזרימה של עמדת תא ומחזור התא בSpheroids מלנומה 3D

סרטונים קשורים

0 צפיות

12:02

לימוד מחזור גנים ביטוי מוסדר על ידי שני פרוטוקולי סינכרון התא

סרטונים קשורים

0 צפיות

12:19

ניתוח של עמדת מחזור התא בתאי יונקים

סרטונים קשורים

0 צפיות

05:38

בדיקת מיצוי RNA: שיטה לחילוץ RNA מתאי סרטן ריאה נגועים miRNA

סרטונים קשורים

0 צפיות

03:02

מיקרו-מערך נוגדנים: טכניקה לחקר ביטוי החלבונים של תאי סרטן ריאה שטופלו ב-miRNA

סרטונים קשורים

0 צפיות

16:24

פרופיל של מיקרו RNA המוסדר אסטרוגן בתאי סרטן השד

סרטונים קשורים

0 צפיות

06:01

ניתוח Clinicopathological ביטוי מירנה שד רקמות סרטן על ידי שימוש מירנה

סרטונים קשורים

0 צפיות

06:00

מבעד למראה: זמן לשגות מיקרוסקופית ו מעקב אורך של תאים בודדים כדי ללמוד Therapeutics אנטי-סרטניות

סרטונים קשורים

0 צפיות

11:44

ניתוח של miRNA קומבינטורית טיפולים כדי להסדיר מחזור התא, אנגיוגנזה

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 29 אוגוסט 2026